GⅡ型诺如病毒衣壳蛋白抗原表位预测及单克隆抗体的制备

发布时间：2017-08-19 14:29

  本文关键词：GⅡ型诺如病毒衣壳蛋白抗原表位预测及单克隆抗体的制备

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【摘要】：目的原核表达诺如病毒衣壳蛋白VP1,制备抗诺如病毒衣壳蛋白VP1的单克隆抗体,并研究其抗原表位特性。方法 PCR扩增GⅡ型湖州株诺如病毒VP1蛋白基因,将目的基因克隆至载体pET28a(+),转化至大肠埃希菌原核表达。纯化表达产物免疫BALB/c小鼠,将成功免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合。用Modeller9.9为诺如病毒GⅡ型湖州株VP1蛋白构建三维模型,构建好的三维模型提交到SEPPA在线B-cell空间表位预测软件,对GⅡ型湖州株VP1蛋白进行空间表位预测。用预测的表位序列来筛选阳性克隆,得到对应这些表位的单克隆抗体。结果成功构建重组表达载体pET28a(+)-Noro-VP1并在大肠埃希菌中获得表达,重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,用预测的抗原表位多肽筛选,获得10株杂交瘤细胞株。与重组蛋白的ELISA结果显示1E8、1P10、2C15和2L16四株反应性最强,其他几株反应性较弱。Western blotting结果显示只有2K10、1K16、1E8三株能与重组蛋白很好的结合。结论成功制备了抗GⅡ型湖州株诺如病毒VP1蛋白的单克隆抗体,抗原表位位于衣壳蛋白的P2区,为制备诺如病毒快速免疫诊断试剂盒及抗原表位的研究提供基础。
【作者单位】： 湖州市疾病预防控制中心;
【关键词】： 诺如病毒 衣壳蛋白 单克隆抗体 抗原表位
【分类号】：R392
【正文快照】： 人类诺如病毒(Noroviruses,NoV)又称诺瓦克样病毒(Norwalk-like viruses),是杯状病毒家族主要成员,为单股正链RNA病毒。NoV是引起急性流行性胃肠炎的常见致病原[1]。有报道称,在美国超过42%的非细菌性胃肠炎暴发都是由NoV引起的[2]。由于NoV容易突变,存在多种抗原的类型和基

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 靖宇,钱渊,王洛平;北京地区人群诺瓦克样病毒血清抗体水平调查[J];病毒学报;1998年04期

2 李潇;周荣;胡龙波;田新贵;钟家禹;盛慧英;王长兵;王友绍;;诺瓦克病毒广州株N蛋白基因的克隆、表达及抗原性鉴定[J];南方医科大学学报;2007年09期

3 刘满清,谭慧,王斌,周玲,康世秀,彭劲松,杨北方,杨继红;90例非轮状病毒腹泻患儿粪便中诺瓦克样病毒的检测[J];疾病监测;2005年07期

4 李潇;周荣;盛慧英;王长兵;田新贵;王友绍;;诺如病毒表达衣壳蛋白单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2008年08期

5 靖宇,钱渊,吴立平,马建瑞;太原市部分人群诺瓦克样病毒血清抗体水平的调查[J];中华儿科杂志;1999年09期

6 郭丽;周红莉;江涛;王敏;计融;王健伟;洪涛;;诺如病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国人兽共患病学报;2006年05期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 赵月萍,马明英,王建军,谢东,任军;一起爆发型柯萨奇病毒性脑炎的病原分离与鉴定[J];安徽预防医学杂志;2001年06期

2 赵月萍,周淑洁,唐继海,罗光焘,潘福龙,夏志才,覃德芹;腮腺炎病毒抗体检测在腮腺炎并发脑膜脑炎诊断中的应用[J];安徽预防医学杂志;2003年06期

3 李国兰;郭玲;李治悦;卜戈;于昌军;张威;杨帆;李建国;王伟;;RT-PCR法在快速检测肠道病毒71型(EV71)核酸中应用[J];安徽医学;2008年04期

4 刘辉;潘家华;;EV71感染临床特点及治疗进展[J];安徽医学;2008年04期

5 江杨帆;刁慧敏;周秀红;何素冰;吴纳新;盛晓蓉;;射岑含片体外抗腺病毒3型作用的实验研究[J];安徽医学;2010年09期

6 顾建华;;百贝宁治疗婴幼儿轮状病毒肠炎[J];安徽医药;2007年01期

7 张宝华;;重组人干扰素a2b治疗流行性腮腺炎临床观察[J];安徽医药;2008年12期

8 夏仁飞;周迎春;黄海军;;番石榴叶水煎液及其总黄酮抗轮状病毒作用研究[J];安徽中医学院学报;2009年03期

9 陈晓琦,曹涛,王继麟,徐葛林;单克隆抗体在呼吸道合胞病毒感染诊断和防治中的应用[J];氨基酸和生物资源;2004年01期

10 陈冬梅,张又,钱渊,Jason Jiang;我国婴幼儿中存在不同基因型杯状病毒的感染[J];病毒学报;2001年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 韩金乐;贾继宗;李川;杨亮;何德磊;李娟;叶祥忠;李益民;;肠道病毒71抗原ELISA定量检测方法构建及其应用[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

2 诸葛小玲;崔大伟;郑书发;陈凌晓;余斐;陈瑜;吴英萍;靳淼;段招军;许世佳;;杭州地区2009-2010年胃肠炎腹泻中杯状病毒流行病学分析[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年

3 方美玉;任瑞文;刘建伟;;我国甲病毒的研究进展及其预防[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2009年

4 戚鹏;韩金祥;鲁艳芹;王传玺;栾中华;卜范峰;;病毒编码的miRNAs:基因表达新的调控因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年

5 刘悦越;刘艳;谷金莲;于洋;国泰;;血清抗轮状病毒IgA诊断试剂的研制[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

6 张亚爽;张颖;李英军;郭涛;陶佳;张会彦;张伟;;RT-PCR技术检测诺瓦克样病毒反应条件的优化[A];2007中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨中国中部地区农产品加工产学研研讨会论文集[C];2007年

7 周伯平;刘威龙;谢靖婧;陈心春;徐六妹;谭艳;刘映霞;杨桂林;;肠道病毒71型重组VP1蛋白的表达和EV71型手足口病血清学诊断方法的建立[A];全国第2届中西医结合传染病学术会议暨国家中医药管理局第1届传染病协作组会议论文汇编[C];2008年

8 刘兆梅;温瑞兴;马洪涛;;中药青龙爪抗HIV-1病毒的实验研究[A];中华中医药学会防治艾滋病学术研讨会暨2006年年会论文集[C];2006年

9 袁斌;任现志;孙轶秋;邹建东;赵长江;刘光陵;陈吉庆;赵德育;徐玲;;清肺口服液治疗小儿呼吸道合胞病毒肺炎166例临床研究[A];第25届全国中医儿科学术研讨会暨中医药高等教育儿科教学研究会会议学术论文集[C];2008年

10 傅燕;高红;刘健毅;;宁波地区婴幼儿轮状病毒VP7序列分析[A];2007年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术年会论文汇编[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 姜淑贞;玉米赤霉烯酮对断奶仔猪的毒性初探及改性蒙脱石的脱毒效应研究[D];山东农业大学;2010年

2 王蕾;单纯疱疹病毒Ⅰ型VP26蛋白在病毒感染过程中的分子生物学功能分析[D];北京协和医学院;2008年

3 时景伟;麻疹疫苗减毒机制及疫苗接种后我国麻疹流行病学特点的研究[D];吉林大学;2011年

4 茅凌翔;肠道病毒71型分子流行病学调查及miRNA抑制肠道病毒71型体外复制的研究[D];江苏大学;2011年

5 徐娟;肠道病毒EV71 VP1基因的优化和免疫原性的研究[D];南京医科大学;2011年

6 卢桂兰;北京地区人偏肺病毒全基因组序列、血清流行率分析及B细胞表位研究[D];北京协和医学院;2009年

7 管莹;与HSV-1 UL31相互作用的宿主蛋白TMEM140生物学功能研究[D];北京协和医学院;2011年

8 郭磊;HSV1 ICP22蛋白转录调控机制研究及其与病毒蛋白VP16、ICP0对病毒基因转录的共调控作用分析[D];北京协和医学院;2011年

9 陈慧诚;肠道病毒71型灭活疫苗（人二倍体细胞）免疫后攻毒及未免疫攻毒恒河猴婴猴丘脑组织的比较蛋白质组学研究[D];北京协和医学院;2011年

10 汤必奎;流感病毒感染致炎的表观遗传学机制研究[D];复旦大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 郑毅;利用酵母双杂交技术研究流感病毒NS2蛋白与宿主蛋白的相互作用[D];华中农业大学;2010年

2 卢士强;甲型H1N1流感病毒NS1蛋白在大肠杆菌中的表达、抗体制备及在血清学检测中的应用[D];南京医科大学;2009年

3 张绍丽;河南省2008年手足口病病原体（EV71）分离株全基因组序列[D];郑州大学;2010年

4 于贺娟;肠道病毒71型荧光RT-PCR检测方法的建立及评价[D];郑州大学;2010年

5 殷坚;秦香颗粒对人轮状病毒致感染乳鼠血清IFN-γ、IL-2的影响研究[D];湖南中医药大学;2010年

6 雷红娟;肠道病毒71型H6株在Vero细胞上的传代适应[D];河南师范大学;2010年

7 费永亮;新疆地区人群乙型肝炎病毒基因型的初步研究[D];新疆农业大学;2010年

8 岳锋;猪瘟病毒感染靶细胞的配体表位研究[D];河南科技学院;2010年

9 郭延锋;CSISV人工感染SPF雏鸡和商品肉仔鸡后免疫器官的细胞凋亡[D];河南科技学院;2010年

10 韩绪军;HCV核酸检测方法建立及药物靶点变异分析[D];昆明理工大学;2009年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 谢华萍,方肇寅,王光,孙利炜,吕红霞,Zhong WM,Tai JH,林思恩,童志礼,章青,Glass RI,Jiang X;长春市儿童医院1998～2001年婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学研究[J];病毒学报;2002年04期

2 方肇寅，，温乐英，晋圣瑾，赵章华;在我国腹泻患儿中发现诺瓦克样病霉感染[J];病毒学报;1995年03期

3 靖宇,钱渊,王洛平;北京地区人群诺瓦克样病毒血清抗体水平调查[J];病毒学报;1998年04期

4 李潇;周荣;胡龙波;田新贵;钟家禹;盛慧英;王长兵;王友绍;;诺瓦克病毒广州株N蛋白基因的克隆、表达及抗原性鉴定[J];南方医科大学学报;2007年09期

5 刘满清,谭慧,王斌,周玲,康世秀,彭劲松,杨北方,杨继红;90例非轮状病毒腹泻患儿粪便中诺瓦克样病毒的检测[J];疾病监测;2005年07期

6 靖宇,钱渊,吴立平,马建瑞;太原市部分人群诺瓦克样病毒血清抗体水平的调查[J];中华儿科杂志;1999年09期

7 陈冬梅,张又,钱渊,杨松;北京地区婴幼儿人类杯状病毒感染状况及型别分析[J];中华儿科杂志;2002年07期

8 吕红霞,方肇寅,谢华萍,唐景裕,胡海宽,郑丽舒,叶青,章青;河北省卢龙县1999～2001年婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学研究[J];中华流行病学杂志;2003年12期

9 陈军林,王滔,高建民,陈骏扬,蔡忠钦,林瑜;福州地区腹泻患者诺瓦克样病毒感染的分子流行病学特点[J];中国人兽共患病杂志;2003年02期

10 郭丽;周红莉;江涛;王敏;计融;王健伟;洪涛;;诺如病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国人兽共患病学报;2006年05期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 靳淼;樊景凤;于天飞;方肇寅;王君伟;;诺如病毒CHN02/LZ35666株RdRp和VP1基因序列分析[J];病毒学报;2007年01期

2 曾玫;王晓红;朱启昒;;诺如病毒及其受体人类组织血型抗原的研究进展[J];临床儿科杂志;2007年12期

3 陈亮;高云英;王华茂;徐蓉;刘素霞;李宗海;;T7噬菌体衣壳蛋白P11的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2008年05期

4 谭淑萍;袁振华;田文洪;董小岩;吴小兵;;抗AAV2单克隆抗体的制备及特性研究[J];病毒学报;2009年04期

5 张绪富;戴迎春;宋灿磊;周迎春;;诺如病毒病毒样颗粒的表达及其与HBGAs受体的结合研究[J];重庆医科大学学报;2011年03期

6 张军,顾颖,欧山海,王颖彬,叶祥忠,林鉴,葛胜祥,夏宁邵;戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位间的构象诱导[J];病毒学报;2004年02期

7 张红梅;孟继鸿;戴星;赵宇;单祥年;;戊型肝炎病毒第Ⅳ基因型毒株中和抗原表位的鉴定[J];中华微生物学和免疫学杂志;2006年12期

8 钟述猷;由单克隆抗体确定的人类T淋巴细胞—新亚类的分离及其部分特征[J];国际免疫学杂志;1983年05期

9 陈善华;;用于诊断试验和亲和层析的单克隆抗体;抗体工程的初步阶段[J];国际生物制品学杂志;1983年03期

10 Berndt MC;杜晓平;Berndt C;阮长耿;;免疫沉淀法鉴定抗人血小板单克隆抗体识别的抗原[J];苏州大学学报(医学版);1986年03期

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1 侯淑萍;刘原君;马t焥

本文编号：701238