抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位单克隆抗体制备和鉴定及其应用

发布时间：2017-08-21 00:36

  本文关键词：抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位单克隆抗体制备和鉴定及其应用

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【摘要】：目的制备抗幽门螺杆菌(Hp)的单克隆抗体(mAb),并对该Hp mAb进行分析鉴定,建立一种检测患者由于Hp感染而在血清中产生Hp抗体的竞争ELISA检测方法。方法用灭活的Hp免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备Hp mAb。我们采用Hp混合蛋白包括毒素相关蛋白A(CagA)、空泡毒素A(VacA)和尿素酶以及灭活的Hp菌体筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA和Western blot等技术对所获得的Hp mAb进行鉴定。利用辣根过氧化物酶(HRP)标记所筛选的Hp mAb来建立一个可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。结果通过大规模的杂交瘤筛选,我们选择了1株将其命名为C3 Hp mAb,其抗体亚型为IgG2a,腹水效价可达1×107。Western blot法、ELISA和质谱检测结果显示,该C3 Hp mAb能特异地识别Hp的尿素酶B亚单位。用这个C3 Hp mAb,我们建立了一种可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。结论成功获得一种可以特异识别Hp尿素酶B亚单位的mAb,建立了一种可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。
【作者单位】： 厦门大学生命科学学院杂交瘤和抗体技术中心;厦门大学附属第一医院检验科;
【关键词】： 幽门螺杆菌 单克隆抗体 竞争ELISA
【基金】：福建省科技重点项目(2011Y0050) 厦门市科技计划项目(3502Z20123009) 国家基础科学人才培养基金(J1310027)
【分类号】：R378
【正文快照】： 1982年Warren和Mashall首次发现一种革兰氏阴性微需氧细菌,称为幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)[1]。目前,Hp感染被公认为是慢性胃炎,胃溃疡的重要病因,50%以上人群的上游消化道都寄居着幽门螺杆菌[2]。目前检测Hp的常用方法采用细菌分离培养、组织染色、快速尿素酶试验等

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