超滤技术去除重组MUC1-MBP融合蛋白中内毒素的效果评价

发布时间：2017-08-22 19:30

  本文关键词：超滤技术去除重组MUC1-MBP融合蛋白中内毒素的效果评价

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【摘要】：目的:评价超滤技术去除纯化后重组MUC1-MBP融合蛋白(MUC1-MBP)溶液中内毒素的效果,阐明超滤技术对去除内毒素的作用。方法:选取表达MUC1-MBP大肠杆菌基因工程菌,分别通过CM Sepharose FF离子交换层析(CM)(CM组)、CM联合Phenyl Sepharose 6FF疏水层析(C6)(CM+C6组)、CM加超滤(CM+超滤组)以及CM联合C6加超滤(CM+C6组+超滤)进行纯化,并去除内毒素;采用SDS-PAGE分析蛋白纯度;鲎试剂显色基质法检测内毒素表达水平。结果:SDS-PAGE分析,在预期相对分子质量62 000处呈现单一条带,Quantity One分析纯度96%;CM组与CM+C6组内毒素表达水平均较高,但2组比较差异无统计学意义(P0.05);与CM组比较,CM+超滤组内毒素表达水平明显降低(P0.01);与CM+C6组比较,CM+C6超滤组内毒素表达水平明显降低(P0.01);CM+超滤组与CM+C6+超滤组内毒素表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:CM或CM联合C6均不能有效去除内毒素,其中C6对去除内毒素几乎无作用;CM加超滤可有效去除内毒素,超滤技术在去除内毒素中发挥重要作用。
【作者单位】： 吉林大学基础医学院免疫学教研室;
【关键词】： MUC-MBP融合蛋白 离子交换层析 疏水层析 超滤技术 内毒素 显色基质法鲎试剂
【基金】：科技部“十二五”重大新药创制专项资助课题(2011ZX09102001-36)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： MUC1-MBP是本实验室将编码人类MUC1基因按正确阅读框插入高效表达麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)的载体pMAL-p2中,构建了表达MUC1-MBP的重组质粒,然后在大肠杆菌中通过扩增培养、IPTG诱导表达及一系列纯化工艺得到的重组MUC1-MBP融合蛋白[1]。内毒素的化学本质

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 徐向荣;马国昌;王昌梅;单剑峰;沈玲;黄岩山;周金宝;;层析法去除重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白的内毒素[J];生物工程学报;2008年01期

2 张朵;李博;兰风华;;以TritonX-114液相分离法去除质粒溶液中的内毒素[J];生物技术通讯;2007年06期

3 张惠新,戴海平,孙方,王龙兴;中空纤维超滤膜去除细菌内毒素效果评价[J];天津工业大学学报;2002年02期

4 王铮,张惠新,戴海平;超滤法去除细菌内毒素[J];卫生研究;2001年05期

5 秦峰,刘学良,魏桂林,王俊德;生物医药制剂中内毒素去除研究进展[J];药物生物技术;2003年01期

6 台桂香,张吉凤,朱迅;重组人MUC1-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫活性测定[J];中国免疫学杂志;2003年11期

7 程春雷;高天勤;;生物制品内毒素的祛除方法研究进展[J];中国新药杂志;2009年05期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 姚向峰;韩飞;;膜分离技术在超纯透析液制备中的应用[J];水处理技术;2009年09期

2 陈丹丹;;过滤和离心对热原实验影响的初步研究[J];生物医学工程与临床;2011年05期

3 邢海新;黄永东;李岩;罗坚;张丽叶;马光辉;苏志国;;亲和介质及溶液条件对蛋白质溶液中内毒素去除的影响[J];生物工程学报;2010年11期

4 李渊;窦国胜;;巯基吡啶配基液相色谱固定相的制备及其对质粒的快速纯化[J];色谱;2007年06期

5 高航;台桂香;马吉春;柳忠辉;;小鼠MUC1基因的克隆及其在大肠杆菌DH5α中的表达[J];中国生物制品学杂志;2007年02期

6 殷玉和;孙博;郭丽姝;所丹;孔维;;中空纤维超滤和疏水层析大规模纯化质粒DNA[J];中国生物制品学杂志;2007年02期

7 王雪薇;王建华;;Triton X-114萃取法去除脑膜炎球菌荚膜多糖中的内毒素[J];中国生物制品学杂志;2008年05期

8 尹楠;郑云枫;彭国平;;基于超滤技术的血塞通注射液的工艺优化[J];天然产物研究与开发;2009年01期

9 李芝芹;邱爽;雷楗勇;陈蕴;金坚;;重组人血清白蛋白-干扰素β融合蛋白的分离纯化及质控方法的建立[J];中国生物制品学杂志;2012年10期

10 刘英微;王曦;张德有;杨旭琴;许宁;张昀;苏锦锋;何亚丽;王树毅;李津;;重组汉逊酵母表达的HBsAg纯化工艺中内毒素的去除效果[J];中国生物制品学杂志;2012年11期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 刘英微;王曦;柳蔷;何亚丽;张德有;马锐;李津;;重组汉逊酵母表达HBsAg纯化过程去除内毒素研究[A];2011中国生物制品年会暨第十一次全国生物制品学术研讨会论文集[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 刘金龙;微生物发酵法制备聚唾液酸的研究[D];江南大学;2011年

2 宋英今;HIV-1治疗性重组DNA疫苗的构建、纯化及实验免疫研究[D];吉林大学;2005年

3 唐守万;芳香氨基酸及内毒素吸附剂的制备与应用[D];中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）;2007年

4 张媛媛;用于内毒素去除的新型亲和吸附剂的制备及性能研究[D];复旦大学;2007年

5 刘鹏;液固界面上蛋白质迁移规律研究[D];西北大学;2009年

6 申镇维;新型HIV多表位重组疫苗的构建、纯化及其实验免疫研究[D];吉林大学;2009年

7 赵小霞;大肠杆菌麦芽糖结合蛋白非特异性活化T细胞及其对血液肿瘤细胞作用机制研究[D];吉林大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 林怡;聚唾液酸修饰铜锌超氧化物歧化酶的研究[D];江南大学;2010年

2 韩依辰;基因治疗用质粒DNA生产及产物纯化的研究[D];长春工业大学;2010年

3 吕名蕊;磷脂酰胆碱富集及热原去除的研究[D];江南大学;2010年

4 李现丽;重组蛋白GGH的分离纯化及药效学初步评价[D];江南大学;2011年

5 管占利;重组人胸腺素Tα1工艺的研究[D];长春工业大学;2011年

6 张淑芳;重组MUC1-MBP融合蛋白抗肿瘤作用机制及其安全性的研究[D];吉林大学;2004年

7 肖婧凡;羟基丁酸和羟基辛酸共聚体的发酵生产及其在医药领域的应用研究[D];山西大学;2006年

8 孙博;质粒D-GPEi纯化工艺及质量检测研究[D];吉林大学;2006年

9 赵玉娟;免疫牛初乳免疫球蛋白加工处理稳定性的研究[D];吉林农业大学;2006年

10 高航;重组鼠源Muc1融合蛋白的制备及免疫活性初步研究[D];吉林大学;2006年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 唱韶红;巩新;杨志愉;王同映;马国昌;马清钧;吴军;;人血清白蛋白和人干扰素α2b的融合蛋白在毕赤酵母中的表达[J];生物工程学报;2006年02期

2 商振华,周冬梅,郭为,于亿年,周良模,潘明臣,周康;聚酰胺亲和膜用于去除内毒素的研究 Ⅰ，

本文编号：721013