抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测技术的建立

发布时间：2017-08-22 22:24

  本文关键词：抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测技术的建立

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【摘要】：目的制备、筛选多株具有商用价值的可配对的高特异性、高亲和力的抗人甲胎蛋白(hAFP)单克隆抗体,初步建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法通过经典的淋巴细胞杂交瘤技术筛选分泌抗hAFP单抗的杂交瘤细胞株;对筛选所得单抗的特性进行鉴定分析;双抗体夹心ELISA法筛选最佳配对抗体;初步建立DAS-ELISA检测方法并检测血样,绘制其标准检测曲线并与进口试剂盒比较。结果共获得12株稳定分泌抗hAFP单抗的杂交瘤细胞株,其中Ab 1~Ab 5 5株单抗的腹水效价均高于600万,Ab 5的效价高达3000万;特异性鉴定结果表明Ab 1~Ab 5均能够特异识别天然hAFP分子,但Ab 5与人血清白蛋白(HSA)存在较强交叉反应;抗体配对实验共筛选出5对(Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4和Ab 4/HRP-Ab 1)能够满足hAFP检测要求且无交叉反应的配对抗体,最终确定Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 2和Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 4为最佳配对组合;利用最佳配对抗体组合建立标准检测曲线,其线性检测范围为5~250 ng/ml,最低检测限2 ng/ml,检测上限400 ng/ml,优于进口试剂盒的线性范围5~200 ng/ml和最低检测限5 ng/ml;样检结果显示自制试剂盒的阳性血清检测准确率99.2%(119/120例),阴性血清准确率100%(40/40例)。结论筛选获得的4株高亲和力、高特异性抗hAFP单抗均可应用于DAS-ELISA试剂盒的研制,Ab 1和Ab 3适合作为捕获抗体,Ab 2和Ab 4适合作检测抗体;自制试剂盒的线性检测范围和最低检测限均优于进口试剂盒,表明具有商用价值。
【作者单位】： 广东省分子免疫与抗体工程重点实验室/暨南大学抗体工程研究中心;
【关键词】： 甲胎蛋白类 抗体 单克隆 双抗体夹心ELISA
【基金】：广东省战略性新兴产业核心技术攻关项目“免疫荧光定量快速检测技术在重大疾病检测中的应用”(2012A080800007)
【分类号】：R392
【正文快照】： 人甲胎蛋白(human alpha fetoprotein,hAFP)是一种由胎儿肝细胞和卵黄囊合成出的胚胎性糖蛋白,其功能与人血清白蛋白(human serumalbumin,HSA)相似,可视其为胎儿发育时期的 HSA替代物[1-2]。正常情况下,hAFP仅存在于胎儿血清中,胎儿出生一年后hAFP浓度降回正常人水平(5 ng/m

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1 王成祖;张瑾;刘池波;刘文琪;;抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定及其初步应用[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年

2 王勤;陈永井;瞿秋霞;张学光;;人可溶性OX40L酶联试剂盒的研制及其运用[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

3 徐竹蔚;宋朝君;刘雪松;李琦;王鑫;庄然;金伯泉;;定量检测多种融合标签的夹心ELISA方法的建立及其初步应用[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

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5 杨世炳;唐久来;盛晓蓉;;人巨细胞病毒pp65DNA疫苗诱导小鼠免疫效应的研究[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年

6 黄永国;张春燕;龚劲松;陈妍;张波;李方和;;小鼠IgG定量ELISA检测实验参比品的制备及其初步应用[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

7 肖海燕;朱平;蒋小滔;富宁;;人HbA_2单抗制备及ELISA检测体系的建立[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

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9 杨云霞;郝杰;王沼丹;;Aβ_(1-42)诱导U251细胞趋化因子RANTES表达的研究[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年

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1 吴春风;抗人诱骗受体3多克隆抗体、单克隆抗体的制备及初步应用[D];吉林大学;2008年

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本文编号：721402