单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP22真核表达载体的构建及其对Vero细胞活性的影响

发布时间：2017-08-24 02:47

  本文关键词：单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP22真核表达载体的构建及其对Vero细胞活性的影响

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【摘要】：目的构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染细胞蛋白22(ICP22)真核表达载体p EGFP-C2/ICP22并研究其对非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞活性的影响。方法经双酶切实验和测序验证,以Xfect为介导将构建的真核表达载体p EGFP-ICP22转染至Vero细胞,并通过反转录PCR(RT-PCR)和绿色荧光检验其在细胞中的表达,最后以MTT法检测细胞活性。结果 48 h后观察,发现转染重组质粒组细胞经RT-PCR验证有目的基因的转录,并通过荧光显微镜观察到融合蛋白表达。而空白质粒组只检测到荧光蛋白但未检测到目的基因转录本,且对照组未检测到荧光蛋白表达。转染重组质粒的细胞相对活性值为(82.39±6.44)%。结论成功构建了p EGFP-ICP22真核表达载体,实现了其在Vero中的表达,融合蛋白GFP-ICP22明显降低了细胞活性。为进一步探讨HSV-ⅡICP22的功能和HSV-Ⅱ潜伏复发机制奠定了实验基础。
【作者单位】： 黄河科技学院医学院实验中心;
【关键词】： 真核表达载体 感染细胞蛋白 单纯疱疹病毒Ⅱ型
【分类号】：R3416
【正文快照】： HSV属于疱疹病毒科α亚科,是人类最为常见的病毒性疾病病原体之一,有HSV-1和HSV-2两种血清型,两型核酸序列同源性高达70%,但感染方式与临床表现却有较大差异[1],且HSV-2感染较HSV-1感染更为普遍。近年来研究表明HSV-2感染可显著增加人类免疫缺陷病毒感染率,并与宫颈癌的发生有

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