柯萨奇病毒A组16型抗原定量检测ELISA方法的建立及初步应用

发布时间：2017-08-26 05:28

  本文关键词：柯萨奇病毒A组16型抗原定量检测ELISA方法的建立及初步应用

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【摘要】：目的建立柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)抗原定量检测的ELISA方法,用于CA16疫苗中抗原的定量检测。方法以纯化的CA16病毒颗粒作为免疫原,分别免疫家兔和BALB/c小鼠,制备抗CA16多克隆抗体和单克隆抗体。以抗CA16多抗作为包被抗体,经HRP酶标记的单抗作为酶标抗体,建立CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,确定该方法的线性范围,并进行准确度、精密度、稳定性及特异性验证。用建立的方法检测CA16疫苗原液制备过程样品中CA16抗原含量。结果以抗CA16多抗为包被抗体,针对74株不同基因型的CA16的ELISA检测结果均为阳性,该抗CA16单抗的广谱性较好。该方法的线性范围为23.4~750 ng/ml,R20.99,最小检出量为23.4 ng/ml;样品回收率在89%~108%之间,CV15%,准确度和精密度较好;抗体包被板干燥后于37℃放置6 d,CV20%,稳定性较好;PV纯化样品、EV71收获液、Vero细胞样品中抗原的A值均小于cutoff值,特异性较好。随着CA16疫苗制备过程的不断进行,中间品1~4比活分别为0.44、0.64、92.13和1 239.03,呈逐渐上升趋势。结论建立了CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,该方法准确度、精密度高,稳定性及特异性较好,为CA16疫苗的研制及工艺开发奠定了基础。
【作者单位】： 北京生物制品研究所有限责任公司;北京微谷生物医药有限公司;
【关键词】： 柯萨奇病毒A组型 抗原 酶联免疫吸附法
【基金】：十二五“重大新药创制”科技重大专项(2013ZX09402302) 北京市科委基金资助(Z131100006513007) 国药新产品基金(2013SW03)
【分类号】：R392
【正文快照】： 近年来儿童手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)在我国持续流行,卫计委已于2008年5月将其列入法定丙类传染病。全国法定传染病报告显示,2012年,HFMD发病数为2 168 737例,死亡567例,与2011年相比,发病率和死亡率分别增长33.26%和10.79%,位居丙类传染病报告发病数首位[1]。

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本文编号：739949