人巨细胞病毒即刻早期基因功能研究

发布时间：2017-08-31 19:00

  本文关键词：人巨细胞病毒即刻早期基因功能研究

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【摘要】：目的探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在体外增殖过程中即刻早期(immediately early,IE)基因的作用。方法设计并化学合成3条靶向IE基因外显子序列的siRNA,应用阳离子脂质体法将干扰序列转染入人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblast,HELF)细胞,用HCMV感染已转染入siRNA的细胞,同时设置正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和转染试剂对照组。采用流式细胞术检测转染效果,荧光定量PCR和琼脂糖凝胶电泳方法检测分析导入的siRNA对IE基因和GAPDH阳性对照基因的抑制效果以及早期(E)基因和晚期(L)基因的表达情况。结果 siRNA成功导入HELF细胞内,6孔板内5μl脂质体可导入的最佳siRNA量约为100pmol,阳性对照组GAPDH表达量较其他对照组有明显的下降(P0.05),抑制率为70.8%;干扰组中3条siRNA对IE基因的表达均有抑制作用。IE基因表达下调后,E基因和L基因的表达较对照组也有明显下降(P0.05)。结论在体外,靶向IE基因的siRNA能有效抑制IE基因的表达从而影响E基因和L基因的表达,表明IE基因的有效表达是E基因和L基因表达的基础。
【作者单位】： 江苏大学临床医学院;镇江市第一人民医院儿科;
【关键词】： 人巨细胞病毒 即刻早期基因 干扰RNA 基因表达
【基金】：江苏省自然科学基金资助项目(BK 2008238)
【分类号】：R373
【正文快照】： 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是双链DNA病毒,在人群中感染十分普遍,近年来已成为引起新生儿先天性疾病和畸形的重要因素之一,但其致病机制仍不甚明了[1~4]。HCMV基因在细胞内的表达具有一定的时序性,按表达的先后顺序可分为即刻早期(immediately early,IE)基因、

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本文编号：767326