HCV1b型core蛋白对Huh7细胞Plk1、CDK1表达的影响

发布时间：2017-09-04 08:13

  本文关键词：HCV1b型core蛋白对Huh7细胞Plk1、CDK1表达的影响

  更多相关文章： 丙型肝炎病毒 核心蛋白 Plk1 CDK1

【摘要】：目的:本文主要研究HCV1b型core蛋白对Huh7细胞Plk1、CDK1表达的影响,以探讨HCV core与细胞周期的关系及可能的机制。方法:1.用脂质体介导技术将重组质粒pcDNA3.1(-)-core转染至Huh7细胞中,同时设置未转染和转染空载体的Huh7细胞作为对照组;脂质体介导将HCV core干扰质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-core和pcDNA3.1(-)-core质粒共同转染至Huh7细胞中,同时设置未转染、转染miR-negative和转染core+miR-negative的Huh7细胞作为对照组。运用RT-PCR和Western blot检测转染细胞中core、Plk1和CDK1mRNA及蛋白的表达;MTT法检测HCV core对Huh7细胞增殖的影响;流式细胞术检测Huh7细胞周期变化情况。结果:1.RT-PCR和Western blot检测到重组质粒pcDNA3.1(-)-core在Huh7细胞内成功表达。2.Huh7/core组中Plk1、CDK1 mRNA和蛋白的相对表达量高于Huh7组、Huh7/空载体组(P0.05),Huh7组和Huh7/空载体组之间比较无统计学差异(P0.05);Huh/core+miR-negative组中Plk1、CDK1mRNA和蛋白的相对表达量高于Huh7组、Huh7/miR-negative组和Huh7/core+miR-core组(P0.05),其余组之间比较无统计学差异(P0.05)。3.MTT法检测Huh7细胞转染1-5天后,Huh7/core组细胞生长速度快于Huh7组、Huh7/空载体组(P0.05),Huh7组和Huh7/core组之间比较无统计学差异(P0.05);Huh/core+miR-negative组细胞生长速度快于Huh7组、Huh7/miR-negative组和Huh7/core+miR-core组(P0.05),其余两组之间的细胞生长速度相比较无统计学差异(P0.05)。4.Huh7/core组与Huh7组和Huh7/空载体相比,G0/G1期、S期细胞数减少,G2/M期细胞数增多(P0.05),Huh7组和Huh7/空载体组之间比较无统计学差异(P0.05);Huh/core+miR-negative组与Huh7组、Huh7/miR-negative组和Huh7/core+miR-core组相比,G0/G1期、S期细胞数减少,G2/M期细胞数增多(P0.05),其余两组之间比较无统计学差异(P0.05)。结论:HCV core蛋白通过上调Huh7细胞中的Plk1、CDK1的表达,促进细胞进入G2/M期,从而加速细胞周期进程,促进细胞增殖。
【关键词】：丙型肝炎病毒 核心蛋白 Plk1 CDK1
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373.21
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 绪论12-14
• 第2章 材料与方法14-26
• 2.1 实验方法14-18
• 2.2 实验方法18-26
• 第3章 实验结果26-36
• 3.1 HCV core的mRNA和蛋白表达26
• 3.2 Plk1及CDK1的mRNA相对表达量26-29
• 3.3 Plk1及CDK1的蛋白相对表达量29-31
• 3.4 MTT法检测细胞增殖31-33
• 3.5 流式细胞术检测细胞周期33-36
• 第4章 讨论36-40
• 第5章 结论40-42
• 参考文献42-46
• 综述46-56
• 参考文献51-56
• 攻读硕士学位期间发表的论文56-58
• 致谢58

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本文编号：790339