稳转STAT6-RNAi细胞株的构建及功能鉴定

发布时间：2017-09-05 19:42

  本文关键词：稳转STAT6-RNAi细胞株的构建及功能鉴定

  更多相关文章： 慢病毒包装 STAT RNAi干涉 感染 HepG细胞

【摘要】：目的探讨RNAi慢病毒载体对HepG2稳转细胞株增殖、迁移的影响。方法感染实验分为4组:空白对照组(未经处理的HepG2细胞),阴性对照组(只感染pLVTHm空病毒),感染pLVTHm-STAT6-RNAi组,感染pLVTHm-STAT6-ORF组。运用病毒感染HepG2细胞获得稳定表达STAT6-ORF和STAT6-RNAi的细胞株,利用PCR和Western blot的方法检测稳定细胞株中STAT6的表达丰度。CCK-8法检测稳转细胞株的细胞活性及Transwell实验检测稳转细胞迁移能力变化。结果通过TET的筛选,成功获得了STAT6-ORF以及STAT6-RNAi的HepG2稳定表达细胞株。与对照组细胞相比,过表达STAT6-ORF转染的细胞增殖快(F=4.279,P=0.021),迁移率高;而STAT6-RNAi转染后,细胞增殖缓慢,随培养时间延长及传代(HepG2传到第三代细胞绝大部分细胞已经死亡),细胞逐渐崩解、漂浮死亡,细胞活性显著降低(F=290.114,P0.001),迁移能力显著下降。结论成功构建STAT6-RNAi和STAT6-ORF稳定株,为后期建立动物模型,体内验证STAT6的生物学功能奠定了物质基础。
【作者单位】： 南阳市中心医院感染科;宁波市感染病医院肝病科;
【关键词】： 慢病毒包装 STAT RNAi干涉 感染 HepG细胞
【基金】：2011年浙江省医药卫生计划(2011KYB107)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)是一种原发于胆管细胞或肝细胞的癌症,是临床上最常见的恶性肿瘤之一,全球发病率居恶性肿瘤第五位。近年来,随着环境因素和社会因素的改变,肝癌的发病率也明显提高,而且患者年龄呈年轻化趋势。研究表明,肿瘤细胞及其周围免疫细胞分泌的

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 盛青;STAT6与支气管哮喘[J];国外医学(呼吸系统分册);2004年01期

2 邓继先,沈伟;用慢病毒载体制备转基因动物的研究进展[J];中国生物工程杂志;2004年09期

3 汤海涛;安春丽;;慢病毒载体的构建及其在基因治疗方面的应用[J];亚太传统医药;2009年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 赵吉清,董兆君,恽榴红,阮金秀;梭曼中毒诱导PC_(12)细胞JAKs表达[J];第三军医大学学报;2003年14期

2 徐述雄;傅晓岚;孙兆林;李晓伟;陈丽萍;刘宏;吴雄飞;;IL-15诱导CD4~+CD25~- T细胞向CD4~+CD25~+调节性T细胞转化的机制探讨[J];第三军医大学学报;2010年08期

3 宋仕玲;干扰素抵抗与JAK/STAT信号通道系统[J];国外医学.病毒学分册;2004年02期

4 任大宾,孙仁宇;白介素-10的抗炎功能及其分子机制[J];国外医学.呼吸系统分册;2005年03期

5 张莉红,徐永健,张珍祥;SOCS在哮喘发病中的作用[J];国外医学.呼吸系统分册;2005年09期

6 张磊;刘庆友;胡天;张晓溪;崔奎青;陆凤花;石德顺;;第三代慢病毒高效率包装系统的建立[J];基因组学与应用生物学;2009年02期

7 朱宇锋;张晶;管泽民;;白介素-10与牙周病的研究进展[J];中华实用诊断与治疗杂志;2009年02期

8 王孟丽;沈晓丽;韩莉莉;林丽芳;浦晓东;;慢病毒载体感染人皮肤成纤维细胞的研究[J];中华实用诊断与治疗杂志;2009年12期

9 王辉;孟庆华;;白细胞介素-10研究进展[J];继续医学教育;2007年32期

10 丁洁;王燕;;携eGFP及表达人gp100-TCR基因的慢病毒表达载体的构建与鉴定[J];免疫学杂志;2011年02期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 祝贺;IL-24基因靶向杀伤卵巢癌细胞及其影响化疗药物敏感性的体外实验研究[D];吉林大学;2011年

2 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒载体的构建及其功能的相关性研究[D];郑州大学;2011年

3 张康;人脑原发复发胶质瘤细胞中STAT3和相关因子的表达变化及As_2O_3诱导人胶质瘤细胞系凋亡对其STAT3表达的影响[D];山东大学;2011年

4 赵东红;肝癌细胞中Wnt及STAT3信号转导途径异常及其功能研究&中国家蚕抗菌肽基因的真核表达[D];南京师范大学;2002年

5 黄定德;SHP-1和SHP-2在γ射线诱发的恶性肿瘤中作用的实验研究[D];第二军医大学;2002年

6 孙红颖;来源于人树突状细胞和骨髓基质细胞的两个新分子CRL2和CLM的克隆与功能的研究[D];浙江大学;2004年

7 于永生;人尿激酶原突变体的构建与特性分析[D];西北农林科技大学;2005年

8 杨帆;1. 慢性粒细胞性白血病融合基因bcr/abl第一外显子条件性基因打靶的实验研究 2. RNA干扰在哺乳动物细胞中的初步应用性研究[D];中国协和医科大学;2004年

9 张道宫;STAT3、Survivin在喉癌中的表达及AG490抑制喉癌细胞STAT3信号传导通路的研究[D];山东大学;2006年

10 于侠;重组白介素-12对小鼠病毒性心肌炎治疗机制的研究[D];吉林大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 周雨;STAT6圈套寡核苷酸对哮喘小鼠气道炎症及Th1/Th2平衡的影响[D];泸州医学院;2011年

2 刘照亮;Tie2基因RNAi慢病毒载体的构建及其干预恶性黑色素瘤细胞的体外研究[D];福建医科大学;2011年

3 游晓庆;牙周致病菌Pg-LPS对组织特异性单核/巨噬细胞炎症因子表达影响的实验研究[D];福建医科大学;2011年

4 郑博娟;脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白在哮喘小鼠中的作用[D];河北医科大学;2011年

5 吴尚青;IL-10基因多态性与HPV感染易感性及宫颈癌的研究[D];河北医科大学;2011年

6 刘红;AG490对支气管哮喘模型小鼠气道重塑的影响及相关机制的研究[D];南京医科大学;2011年

7 袁婷;慢病毒载体介导的RNAi靶向沉默HSP70基因对淋巴瘤细胞凋亡的影响[D];山东大学;2011年

8 张凤久;BDNF基因修饰施万细胞结合组织工程技术治疗周围神经损伤的研究[D];内蒙古科技大学包头医学院;2010年

9 李燕丽;猪CCL17基因的克隆与原核和真核表达[D];西北农林科技大学;2010年

10 曹齐树;猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及E基因假病毒的构建[D];华中农业大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 李振宇;慢病毒载体构建及结构优化[J];国外医学(分子生物学分册);2002年05期

2 邓继先,沈伟;用慢病毒载体制备转基因动物的研究进展[J];中国生物工程杂志;2004年09期

3 程联胜;查昭;席甲甲;江冰;刘兢;姚雪彪;;慢病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2受体的下调及生长抑制[J];中国生物工程杂志;2007年02期

4 徐晓明;杨慧;王晓萍;;慢病毒载体的构建及优化[J];中国临床康复;2006年09期

5 张经纬;冯建翔;徐荣明;赵金忠;曾炳芳;;慢病毒介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染促进半月板纤维软骨细胞的增殖与基质合成[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年41期

，

本文编号：799921