AAV-ITR单链DNA微载体在小鼠骨骼肌中的表达

发布时间：2017-09-06 11:10

  本文关键词：AAV-ITR单链DNA微载体在小鼠骨骼肌中的表达

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【摘要】：AAV-ITR单链DNA微载体是一种基于腺相关病毒(AAV)倒置末端重复序列(ITR)的基因表达载体(AAV-ITR ss DNA mini vector)。前期研究已证明AAV-ITR单链DNA微载体在HEK 293T细胞中具有较高的转染、表达效率。本文中将相同拷贝数的AAV-ITR单链DNA微载体、3?-ITR末端错配的AAV-ITR单链DNA微载体(AAV-ITRmm ss DNA mutant vector)、AAV-ITR双链DNA和质粒分别用Turbo Fect转入小鼠骨骼肌中,比较检测AAV-ITR单链DNA微载体与其他基因表达载体在小鼠体内1周、1个月及3个月的表达效率。组织切片经荧光显微镜观察及荧光灰度值分析表明,相同分子摩尔数的AAV-ITR单链DNA微载体比AAV-ITR双链DNA和质粒在不同时期表达效率都要高且更稳定。提取注射3个月后的肌肉组织的DNA,用荧光定量PCR分析比较各载体的存留分子数。RT-PCR的结果显示AAV-ITR单链DNA微载体在注射3个月后的存留分子数较其他载体高。综合结果显示AAV-ITR单链DNA微载体在动物体内具有表达效率高和长久稳定的优势,有可能开发为基因治疗的一种高效、稳定的新型载体。
【作者单位】： 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所苏州市分子诊断和治疗技术重点实验室;
【关键词】： 腺相关病毒(AAV) 倒置末端重复序列(ITR) 基因表达微载体 体内表达 RT-PCR 基因治疗
【基金】：国家自然科学基金(No.81371670) 江苏省自然科学基金(No.BK2012629) 苏州市科技局项目(No.ZXY2012005)资助~~
【分类号】：R3416
【正文快照】： 目前用于基因治疗的载体主要有病毒载体(如逆转录病毒、痘病毒、腺病毒、腺相关病毒等)和非病毒载体(如质粒载体)[1-6]。病毒载体虽然效率高但容易引起不同程度的免疫反应和炎症反应,而且还存在插入突变、致癌等风险[7-9]。一些病毒载体还有包装基因容量的限制,如腺相关病毒(A

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本文编号：802773