乙型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2017-09-07 20:29

  本文关键词：乙型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

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【摘要】：目的建立一种采用Lightcycler系统进行HBV DNA实时荧光定量PCR的方法,并探讨其临床应用价值。方法针对HBV基因组S区设计一对扩增引物,并通过预实验严格优化反应体系的组成和条件;将T载体与HBV RT区扩增后纯化的产物进行连接反应,然后转染大肠杆菌(DH5α),经蓝、白斑筛选后挑取阳性菌落,提取质粒,制备外标准品。结果用于制成外标准品的质粒经1∶10的缓冲液倍比稀释,制作标准曲线,线性方程为:Y=-3.344 X+37(r2=0.999 9);通过检测已知浓度并经倍比稀释的HBV DNA,表明其最低检测限为5×102 IU/mL;拷贝数介于5×102~5×108 IU/mL之间的HBV DNA浓度与Ct值具有良好的线性关系。结论外标法实时荧光定量PCR是一种定量相对准确、灵敏度高、特异性强、操作相对简便的方法;该方法可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药;联合该法与血清标志物检测,可更准确评价HBV感染者病情。
【作者单位】： 武汉大学人民医院检验科;
【关键词】： 肝炎病毒 乙型 聚合酶链反应 质粒
【分类号】：R373.21
【正文快照】： HBV属于嗜肝DNA病毒科的双链DNA病毒,它可引起急、慢性肝炎。据世界卫生组织统计,全球约有20亿人感染HBV,且有3.5亿人处于持续感染的状态,每年全球因肝细胞癌或肝衰竭死亡的患者约有100万人[1]。因此,HBV感染的治疗一直是临床上占据重要地位的议题。由于患者血清中的HBV载量与

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本文编号：809696