人羊膜间充质干细胞分离培养:胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择

发布时间：2017-09-10 04:50

  本文关键词：人羊膜间充质干细胞分离培养:胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择

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【摘要】：背景:文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致,得到的细胞数量各不相同。目的:探索人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,分别通过4个实验7种方法体外培养人羊膜间充质干细胞。①实验一:分别采用3种方法:0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min;0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min;0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min。②实验二:采用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min。③实验三:分别采用2种方法:0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后,再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min;0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化40 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min。④实验四:采用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后,再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。显微镜下观察其形态,研究人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。结果与结论:用0.05 g/L的胰蛋白酶连续消化2次每次消化30 min,然后用1 g/L的胶原酶消化60 min是最合适的体外分离培养条件。细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1-3个核仁。说明实验四采用的胰酶和胶原酶消化的时间合适,而且胶原酶的浓度合适,得到的细胞数量最多。
【作者单位】： 内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学实验室;
【关键词】： 干细胞 培养 间充质干细胞 羊膜间充质干细胞 细胞培养 胰蛋白酶 胶原酶 项目
【基金】：国家高技术研究发展863项目(2008AA101005),课题名称:家畜胚胎干细胞技术研究~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 0引言Introduction干细胞是一种能够自我更新且未分化的细胞,在一定的条件下,干细胞能够分化成为多种成熟细胞类型。按照来源和分化潜能不同,干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞两类[1]。胚胎干细胞来源于早期的胚泡和胚胎内层的细胞群,并且具有向3个胚层细胞分化的能力[2-3]

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