Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基

发布时间：2017-09-15 02:00

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【摘要】：目的采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基。方法在自主研发的含蛋白无血清培养基的基础上,通过Plackett-Burman试验和响应面试验设计考察23组营养物质对MDCK细胞生长的影响,以细胞比生长速率、维持时间及最大活细胞密度作为响应值进行筛选和定量优化。以最优化的因子浓度配制化学成分明确的无血清无蛋白培养基,分别于细胞培养板和搅拌瓶中培养MDCK细胞,考察细胞比生长速率、维持时间和最大活细胞密度3个响应值的大小。结果通过Plackett-Burman试验筛选出4种对MDCK细胞生长具有显著性促进作用的因子:半胱氨酸、苏氨酸、亮氨酸和葡萄糖,苏氨酸和亮氨酸有助于提高细胞比生长速率,半胱氨酸和葡萄糖有利于提高最大活细胞密度;该化学成分明确的无血清无蛋白培养基能很好地支持MDCK细胞悬浮生长,单细胞悬浮培养MDCK细胞时,细胞比生长速率可达0.058/h,最大活细胞密度可达32.65×105个/ml,分别比基础培养基提高了2.15和3.09倍。结论采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化了化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基,为采用MDCK细胞大规模工业化生产流感疫苗奠定了基础。
【作者单位】： 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室;上海生物制品研究所有限责任公司第四研究室;
【关键词】： MDCK细胞 无蛋白培养基 Plackett-Burman试验设计 响应面分析
【基金】：国家自然科学基金资助项目(21206040) 国家科技重大专项基金资助项目(2013ZX10004003-003-003)
【分类号】：R392
【正文快照】： 近年来,动物细胞培养技术迅速发展,已成为生物学、医学研究、生物药物生产和应用中广泛采用的技术方法,而培养基是动物细胞培养中的重要因素,其提供适合细胞生存、扩增的合适pH和渗透压,以及一些细胞需要但自身无法合成的大分子化学物质,是动物细胞培养技术的核心之一。传统

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本文编号：853616