基于双荧光素酶报告基因系统建立miR-140生物传感器

发布时间：2017-09-15 22:03

  本文关键词：基于双荧光素酶报告基因系统建立miR-140生物传感器

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【摘要】：目的:利用双荧光素酶报告基因系统构建可检测miR-140活性的生物传感器。方法:首先,在psiCHECK-2双荧光报告基因质粒的多克隆位点插入miR-140成熟体的4个拷贝反义序列,构建miR-140sensor。其次,将miR-140 sensor和miR-140 mimics共转染HEK-293T细胞,利用双荧光素酶报告基因系统检验miR-140 sensor的功能。最后,转染miR-140 sensor至大鼠骨髓间充质干细胞(rat MSCs),分析在成软骨诱导中miR-140的活性变化,并与miR-140的表达水平相比较。结果:在HEK-293T细胞中,相对于阴性对照组,miR-140 sensor与miR-140 mimics共转能明显降低49%(20 nmol·L-1)和65%(50 nmol·L-1)的荧光活性。将转染miR-140 sensor的rat MSCs成软骨诱导7 d后,荧光活性降低43%,提示miR-140活性升高,与RT-qPCR法检测的miR-140表达水平相一致。结论:构建的miR-140 sensor是一种简单方便有效的miRNA传感器,可用于检测miR-140活性。
【作者单位】： 南京医科大学附属友谊整形外科医院科教办;南京师范大学生命科学学院分子细胞生物学研究所;南京医科大学第二附属医院整形外科;
【关键词】： miR-生物传感器 荧光素酶 实时荧光定量聚合酶链反应 成软骨诱导
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81071480)
【分类号】：R346
【正文快照】： 成熟的microRNAs(miRNAs)是一类高度保守的内源性非编码小分子RNA(约22 nt),通过完全或部分互补结合靶mRNAs的3'端非翻译区(3'UTR)负调控靶基因表达[1-2]。miRNAs具有组织特异性及发育时序性[3],与靶基因之间是多对多的关系,形成复杂的调控网络。miRNAs的异常表达常常与疾病的

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本文编号：859133