大鼠毛囊干细胞的体外培养及相关检测的实验研究
本文关键词：大鼠毛囊干细胞的体外培养及相关检测的实验研究
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【摘要】：目的:建立体外分离培养、扩增、鉴定大鼠毛囊干细胞(rat hair follicle stem cells,rHFSCs)的方法,观察其生物学特性。方法:切取1周龄SD大鼠触须部皮肤,用Dispase酶和IV型胶原酶混合液消化,显微镜下分离毛囊隆突部,用组织块法培养rHFSCs,培养基为DMEM/F12基础培养基,加不同浓度的KSR血清替代物、青链霉素混合液、L-谷氨酰胺、非必需氨基酸、EGF、bFGF、羟基乙醇和氢化可的松。用IV型胶原差速贴壁法纯化rHFSCs,再通过细胞免疫荧光染色及Q-PCR检测相关基因来联合鉴定,分别取不同代rHFSCs检测细胞增殖能力和活力。结果:以上方法分离、培养、纯化的HFSCs呈典型的铺路石状,贴壁较牢,克隆形成能力强。免疫细胞化学鉴定可见角蛋白15(Keratin-15,Krt15)、整合素α6(Integrin-α6,Itgα6)和整合素β1(Integrin-β1,Itgβ1)抗体表达呈阳性。纯化后的细胞最初2~3d细胞处于生长的潜伏期,5~6d时细胞处于对数生长期;从第7代开始,随着传代次数的增加,细胞活力也明显下降。Q-PCR检测发现,经过全新的培养体系得到的干细胞活性大,拥有较强的增殖能力,几乎不含有表皮角质形成细胞。结论:改进的显微镜联合组织块法分离培养rHFSCs,经IV型胶原差速贴壁法筛选后,可得到高纯度的rHFSCs,细胞增殖能力强,可以为干细胞组织工程学构建人工毛囊、血管及皮肤等提供良好的种子细胞。
【作者单位】： 浙江省萧山中医院;
【关键词】： 毛囊干细胞 Q-PCR 免疫细胞化学 创伤修复与再生
【基金】：浙江省公益技术应用研究社会发展项目(No.2010C330133)
【分类号】：R329
【正文快照】： 干细胞是一种具有未分化性、自我更新快和体外增殖能力强等特点的未分化细胞,而毛囊干细胞(Hair follicle stem cells,HFSCs)被普遍认为主要存在于毛囊外根鞘(Outer root sheath,ORS)的隆突部(bulge)[1~2]。研究表明体外培养的HFSCs表现出了高克隆形成能力,且具有非常高的再生
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本文编号：894442
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