罗汉果GAPDH基因的克隆及其在基因表达分析中的应用

发布时间：2017-09-21 13:47

  本文关键词：罗汉果GAPDH基因的克隆及其在基因表达分析中的应用

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【摘要】：目的克隆罗汉果甘油酸-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH,EC 1.2.1.12)基因,分析其在基因表达定量研究中其作为内部参照基因的可行性。方法采用同源克隆和cDNA末端快速克隆技术,以罗汉果cDNA为模板扩增GAPDH基因的保守区片段。结果获得了罗汉果GAPDH保守区序列cDNA,命名为SgGAPDH(GenBank注册号:KC410810),序列长度为627 bp,编码209个氨基酸的多肽。系统发育分析表明,SgGAPDH属于植物甘油酸-3-磷酸脱氢酶家族。半定量PCR分析表明罗汉果GAPDH基因在不同组织中表达很稳定。以其作为内部参照基因,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)研究了异戊烯基焦磷酸异构酶(Isopentenyl-diphosphate delta isomerase)的组织表达规律。结果显示SgGAPDH具有良好的扩增效果和重现性。结论首次克隆了罗汉果GAPDH基因,明确了该序列在基因表达分析中的内参照作用,为罗汉果甜苷生物合成基因的研究提供了条件。
【作者单位】： 桂林医学院药学院;桂林亦元生现代生物技术有限公司;兰州城市学院;
【关键词】： 罗汉果 甘油酸--磷酸脱氢酶 内参基因 实时荧光定量PCR
【基金】：国家自然科学基金(No.81260619) 广西教育厅高校科研项目(No.201204LX256) 国家级大学生创新创业训练计划项目(No.201210601005) 广西高校大学生创新创业训练计划项目(No.599) 桂林医学院“项目驱动教学”专项课题(No.10)
【分类号】：R346
【正文快照】： 基因表达定量研究是了解植物代谢机制和分子功能的重要手段和基础。相比传统的Northern杂交(Northern blotting)、半定量RT-PCR、基因芯片(microarray)等方法,实时定量PCR(real-time PCR)准确、快速、可靠、灵敏度高,因而得到了广泛的应用。然而,由于受初始模板量、RNA完整性

【参考文献】

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1 朱华;李s，

本文编号：894879