阈值法检测人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量方法的建立及初步验证

发布时间：2017-09-22 12:25

  本文关键词：阈值法检测人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量方法的建立及初步验证

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【摘要】：目的建立一种阈值法(threshold method)检测人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量的方法。方法取人用狂犬病疫苗进行DNA抽提后,与内控品经高温变性、冰浴后,37℃水浴1 h,加入生物素标记的单链DNA结合蛋白(single stranded binding protein,SSB)和尿素酶标记的抗单链DNA(single stranded DNA,ssDNA)的单抗,与变性的宿主细胞DNA结合形成复合物,经过滤、洗涤后,将复合物吸附于硝酸纤维素膜上,置Threshold仪器样品检测池中,检测DNA含量。对建立的阈值法测定人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量的方法进行线性范围、准确性及精密度验证。结果该方法的最低检测限为3 pg/500μl,线性范围为3~200 pg/500μl,DNA内控品浓度的对数与相应的检测信号值的对数呈良好的线性关系(R2=0.98);该方法检测不同企业疫苗样品的回收率为99%~124%,变异系数为8.5%,加入内控品后再抽提,不同企业疫苗样品的回收率为48%~128%,变异系数为32.9%;同1批疫苗重复10次的检测结果的CV值为7.8%,同1批疫苗不同时间检测结果的CV值为11.8%。结论阈值法可检测人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主DNA残留量,该方法操作简便,灵敏度好,准确性及精密度高,对人用狂犬病疫苗生产和质量控制具有较好的指导意义。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室;
【关键词】： 阈值法 狂犬病疫苗 DNA 含量测定
【基金】：“十二五”863计划课题“疫苗效果和质量评价新技术研究”(2012AA02A402)
【分类号】：R373.9
【正文快照】： 以Vero细胞为基质生产的人用狂犬病疫苗,因Vero细胞为连续传代细胞系,理论上其细胞DNA具有潜在的致瘤性。目前文献报道其140代左右无致瘤性[1-2],国内疫苗生产企业Vero细胞代次限定在150代之内,但对于以其为基质生产的疫苗中宿主细胞DNA残留量,各国药品监管机构均进行了严格限

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本文编号：900812