CFP10-ESAT-6-MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定

发布时间：2017-09-22 12:27

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【摘要】：目的:在杆状病毒昆虫细胞表达系统(baculovirus expression vector system,BEVS)中表达结核分枝杆菌蛋白CFP10-ESAT-6-MPB64,并鉴定其免疫原性。方法:目的基因CFP10-ESAT-6-MPB64连接到pFastBac转移载体并转化DH10Bac感受态,通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中,得到Bacmid-CFP10-ESAT-6-MPB64穿梭载体,脂质体包被后转染Spodoptera frugiperda(Sf9)细胞收获病毒,病毒转染细胞后收集上清通过Co亲和层析纯化得到目的蛋白。纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠并检测血清中特异性抗体滴度及PPD抗体,ELISA检测CFP10-ESAT-6-MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度,MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果:CFP10-ESAT-6-MPB64在昆虫细胞中成功表达,纯化后蛋白纯度达90%以上,蛋白产量为42mg/L,纯化蛋白能有效刺激Balb/c小鼠产生抗体,提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量,目的蛋白在1~50μg/ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。
【作者单位】： 温州医科大学浙江省生物技术与制药工程重点实验室;吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心;济南康和医药科技有限公司;巨野县人民医院;
【关键词】： BEVS Sf细胞 结核分枝杆菌
【基金】：国家“863”计划(SQ2011AA100606) 浙江省自然科学基金(LY13H300006) 2012年省级重点科技创新团队项目(2012R10042-10) 2012年吉林省高层次创新创业引进人才项目资助项目
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的通过空气传播的人兽共患传染病。据世界卫生组织报道,在2011年,约有870万名新增结核病例(13%感染了艾滋病病毒)和140万人死于结核病[1]。结核病已成为我国乃至世界危害最严重的疾病之一。越来

【共引文献】

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本文编号：900822