慢病毒介导的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表达系统的建立

发布时间：2017-09-24 16:08

  本文关键词：慢病毒介导的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表达系统的建立

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【摘要】：目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD18-T-HA重组载体。设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-HA质粒中扩增出平末端HA基因,采用Topo克隆构建表达载体pLenti-HA-V5。将表达载体转染HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法鉴定HA蛋白的表达,通过血凝实验鉴定重组蛋白的生物学活性。结果经反转录PCR获得1 683 bp的HA全长基因,完成真核表达载体的构建并表达出相对分子质量(Mr)为70 000的重组蛋白。IFA和Western blot法结果显示该蛋白与阳性血清具有良好的免疫反应,同时血凝实验证实其具有血凝活性。结论成功利用慢病毒载体建立了HA蛋白的快速真核表达系统,为研制H7N9病毒亚单位疫苗、中和表位研究、假病毒包装奠定基础。
【作者单位】： 江苏省疾病预防控制中心卫生部肠道病原微生物重点实验室;
【关键词】： HN禽流感病毒 血凝素基因 慢病毒载体 真核表达系统
【基金】：国家科技重大专项(2012ZX10004-210-004)
【分类号】：R373.13
【正文快照】： 2013年4月初在中国地区首次分离到人感染H7N9禽流感病毒[1],据国家卫生计生委统计,截止2013年5月31日全国共报道确诊病例131人,死亡病例39人,病死率高达29.8%,给公共卫生带来极大的安全隐患[2]。由于流感病毒容易变异,早期发病的诊断显得尤为重要。目前,检测流感病毒的技术主

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本文编号：912330