HIF-1α转染方法的优化及其对间充质干细胞存活及分化功能的影响

发布时间：2017-09-25 16:18

  本文关键词：HIF-1α转染方法的优化及其对间充质干细胞存活及分化功能的影响

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【摘要】：目的探索应用脂质体作为载体将低氧诱导因子-1α(HIF-1α)转染至间充质干细胞(MSCs)的转染方法。方法应用脂质体作为载体将HIF-1α转染至P3代MSCs,荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,评估转染效率。比较在不同情况下细胞的转染效率。将转染的MSCs、空质粒转染的MSCs和未转染的MSCs置于缺氧环境下(CoCl2模拟缺氧),比较3种细胞HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白的表达。鉴定转染的MSCs向成骨细胞和脂肪细胞的分化能力,及在缺氧环境中的存活率。结果应用脂质体法可以成功将pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP转染至MSCs。当细胞汇合度在80%以上,DNA与质粒的比为(μg/μL)1∶1.25,且转染时间为4 h时转染效率最高,为21%。转染HIF-1α的MSCs在缺氧环境中可被成功向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化,HIF-1α转染可以提高缺氧时MSCs存活率(P0.05)。在缺氧条件下pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP瞬时转染的MSCs较空质粒(pcDNA3.0-eGFP)转染的MSCs和未转染的MSCs能高表达HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白(P0.05)。结论应用脂质体作为载体可以将HIF-1α转染至MSCs,HIF-1α转染的MSCs在缺氧时高表达HIF-1αmRNA及蛋白。
【作者单位】： 沈阳医学院附属奉天医院手外科;
【关键词】： 骨髓间充质干细胞 低氧诱导因子- 脂质体 转染
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是一种关键的平衡氧稳态和调节低氧反应的转录因子,广泛存在于低氧条件下的哺乳动物和人体内,可以调控多种靶基因的转录,在许多低氧性疾病的病理生理过程中都发挥着重要作用。由于它是在低氧条件下诱导而产生,因此被命名为低

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本文编号：918365