中东呼吸综合征冠状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2017-09-26 00:31

  本文关键词：中东呼吸综合征冠状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

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【摘要】：目的建立一种快速、敏感、特异的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法,用于中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的检测。方法根据中东呼吸综合征冠状病毒S蛋白基因的保守序列设计并合成一对引物及一条特异性TaqMan探针。通过条件优化,以10倍系列稀释重组质粒为标准品,进行Real-time PCR扩增,绘制标准曲线,并进行重复性、准确性、特异性及敏感性检测。结果建立的Real-time PCR方法检测中东呼吸综合征冠状病毒所绘制标准曲线的相关系数0.99,灵敏度为1.00×101拷贝,高于常规PCR方法(1.00×102拷贝);用该方法检测中东呼吸综合征冠状病毒基因为阳性,其他6种对照呼吸道病原体及冠状病毒基因检测均呈阴性;批内、批间重复试验的变异系数均1%。结论建立的中东呼吸综合征冠状病毒Real-time PCR检测方法灵敏、特异、重复性好,可用于中东呼吸综合征冠状病毒感染的快速诊断和流行病学调查。
【作者单位】： 军事医学科学院军事兽医研究所;吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;中国农业科学院生物技术研究所;
【关键词】： 中东呼吸综合征冠状病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针 检测方法
【基金】：国家科技支撑计划项目(No.2013BAD12B04) 中国博士后科学基金项目(No.2013M541089)
【分类号】：R373.1
【正文快照】： 中东呼吸综合征(Middle East respiratory syn-drome,MERS)是由中东呼吸综合征冠状病毒(MiddleEast respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)引起的一种高致病性、急性下呼吸道传染病。与SARS冠状病毒感染相似,人感染MERS-CoV后会出现急性、严重呼吸道疾病,伴有发热、咳嗽

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