含人组织激肽释放酶1和基质金属蛋白酶组织抑制物1基因共表达载体对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

发布时间：2017-10-04 01:35

  本文关键词：含人组织激肽释放酶1和基质金属蛋白酶组织抑制物1基因共表达载体对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

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【摘要】：背景和目的前期研究表明人组织激肽释放酶1(hTK1)基因过表达具有部分抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和改善血管再狭窄的作用,但联合基质金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)对VSMC增殖是否具有协同效应,目前尚不明了。本研究构建含双基因hTK1和hTIMP1的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠VSMC中的表达,以及对VSMC生长增殖影响。方法采用限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ,酶切含启动子CMV和hTIMP1基因片段的重组穿梭质粒,经PCR、连接、热激、转化等亚克隆至pDC316-hTK1质粒中,构建含双基因hTK1和hTIMP1的重组穿梭质粒。将骨架质粒和穿梭质粒于293A细胞包装重组腺病毒载体。感染大鼠VSMC后,采用RealtimePCR法、Western blot法检测目的基因转录、蛋白表达。细胞计数法和四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞增殖。结果经PCR、酶切和测序法证实,含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组病毒穿梭质构建正确。在293A细胞中成功包装出重组腺病毒载体Ad-hTK1-hTIMP1。感染VSMC后,双基因(hTK1和hTIMP1)的转录水平表达呈现随感染复数(50~150 MOI)和时间(1~3d)依赖性地增加,目的蛋白(hTK1和hTIMP1)亦呈现浓度依赖性地高表达。与单基因载体(Ad-hTK1或Ad-hTIMP1)相比较,双基因载体可明显抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠VSMC增殖(P0.01),其峰值抑制率为45.7%。结论首次成功构建并包装重组腺病毒双基因载体Ad-hTK1-hTIMP1。感染细胞后,其目的基因和蛋白均呈现独立高表达,并具有协同抑制VSMC增殖的效应,为血管增殖性疾病的多基因干预治疗实验提供一个新工具。
【作者单位】： 福建省立医院干部特诊二科;福建省立医院老年医学研究室;福建省临床老年病研究所;福建医科大学省立临床医学院;
【关键词】： 人组织激肽释放酶 人基质金属蛋白酶组织抑制物 重组腺病毒载体 血管平滑肌细胞 基因表达 细胞增殖
【基金】：福建省自然科学基金面上项目(2011J01134;2013J01273) 福建省卫生厅青年骨干培养人才项目(2013-ZQN-ZD-2)
【分类号】：R363
【正文快照】： 朱鹏立,余惠珍,黄舒洁,向红,张枫,潘玮,李峰,林帆福建省立医院干部特诊二科,福建省立医院老年医学研究室;福建省临床老年病研究所;福建医科大学省立临床医学院;福建福州350001血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖、迁移以及细胞外基质(extracellular ma-tr

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本文编号：967932