一步法多重荧光定量RT-PCR检测人杯状病毒的建立及应用

发布时间：2017-10-05 22:04

  本文关键词：一步法多重荧光定量RT-PCR检测人杯状病毒的建立及应用

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【摘要】：目的建立检测人杯状病毒(human calicivirus,HuCVs,主要包括SV、NoV-GⅠ和NoV-GⅡ)的一步法多重荧光定量RTPCR(rRT-PCR)法。方法用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,通过合成的对应病毒基因的质粒来评价该方法的灵敏度、特异性和重复性,检测临床标本并对阳性结果进行基因测序验证。结果建立的rRT-PCR法检测SV、NoV-GⅠ和NoV-GⅡ的灵敏度均达到103copies/mL,特异性为100%,且变异系数(CV)均≤1.275%。HuCVs检出率为21.43%(75/350),其中SV、NoV-GⅠ和NoV-GⅡ分别为14.67%(11/75)、21.33%(16/75)和64.00%(48/75)。随机选择检测阳性结果进行测序,结果均与该法检测结果一致。结论建立的rRT-PCR法可同时检测并区分SV、NoV-GⅠ和NoV-GⅡ病毒,可用于HuCVs引起的急性腹泻散发和暴发疫情的监测。
【作者单位】： 浙江大学医学院;浙江中医药大学附属第一医院检验科;浙江大学医学院附属第一医院检验科;浙江大学医学院附属第二医院检验科;
【关键词】： 人杯状病毒 札如病毒 诺如病毒 一步法多重荧光定量聚合酶链反应
【基金】：浙江省医药卫生科技计划项目(2012kyb142)
【分类号】：R373
【正文快照】： 人杯状病毒(human calicivirus,HuCVs)包括两个属:诺如病毒属(norovirus,NoV)和札如病毒属(sapovirus,SV),而SV、NoV-GⅠ和NoV-GⅡ亚型是导致人类发生急性腹泻的散发或暴发性流行的常见原因[1-3]。由于HuCVs难以培养,而ELISA法和免疫荧光法等敏感性和特异性不高[4-6],因此常用

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1 方肇寅;谢华萍;吕红霞;刘娜;章青;段招军;Duncan Steele;Baoming Jiang;Xi Jiang;;1999~2005年我国婴幼儿人杯状病毒腹泻研究[J];病毒学报;2007年01期

2 谢华萍;方肇寅;章青;欧阳晶;;一种简单高效扩增人杯状病毒ORF2区RT-PCR方法的建立及其意义[J];病毒学报;2006年04期

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本文编号：979064