缺失TC7L-TK2L基因减毒天坛株痘苗病毒构建及筛选

发布时间：2017-10-06 20:20

  本文关键词：缺失TC7L-TK2L基因减毒天坛株痘苗病毒构建及筛选

  更多相关文章： 重组天坛株痘苗病毒 病毒载体 同源重组 TCL-TKL基因

【摘要】：目的通过敲除天坛株痘苗病毒(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)的复制非必需基因TC7L-TK2L,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术构建TC7L-TK2L基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TC7L--TK2L-。方法人工合成含有痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的重组臂,构建穿梭质粒pTC7L-TK2L-EGFP,再与VTT共转染BHK-21细胞,通过连续筛选10次,获得含有筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L--EGFP+;利用Cre/loxp系统敲除EGFP,连续筛选10次,获得无筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,用PCR方法对rVTT-TC7L--TK2L-进行鉴定和遗传稳定性检测,用电镜观察病毒形态变化,并通过绘制生长曲线观察病毒在细胞内的复制情况。结果 PCR结果表明,成功构建了重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,且具有良好的遗传稳定性;电镜观察痘苗病毒缺失TC7L-TK2L基因未影响病毒形态;生长曲线显示敲除TC7L-TK2L基因后病毒毒力显著下降,但不影响病毒的正常复制。结论成功构建了痘苗病毒减毒株rVTT-TC7L--TK2L-,该重组痘苗具有良好的遗传稳定性且毒力减弱。
【作者单位】： 吉林农业大学动物科学技术学院;军事医学科学院军事兽医研究所;吉林省肿瘤医院头颈外一科;
【关键词】： 重组天坛株痘苗病毒 病毒载体 同源重组 TCL-TKL基因
【基金】：国家863计划项目(No.2012AA02A407) 国家新药创制科技重大专项(No.2014ZX09304314-002) 国家自然科学基金项目(No.81101140) 吉林省产业技术创新战略联盟项目(No.20140309006YY) 吉林省重点科技攻关项目(No.20130206041NY)
【分类号】：R392
【正文快照】： 3.吉林省肿瘤医院头颈外一科,吉林长春130021)***痘苗病毒(vaccina virus,VACV)属于痘病毒科(Poxviridae)正痘病毒属(Orthopoxvirus),具有大型双链DNA基因组并在细胞胞浆内复制[1]。目前VACV已广泛应用于基因工程疫苗载体及外源基因表达系统等研究领域[2-6]。VACV编码许多非必

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王宇航;李霄;王浩然;阚式绂;王卓越;齐延新;吴娜;杜寿文;金宁一;;缺失E3L基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选[J];中国兽医学报;2011年11期

2 盛媛;王浩然;胡宁宁;陈智飞;王宏宇;姜爽;周晔;李一权;李霄;金宁一;;天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株的构建及鉴定[J];中国兽医学报;2014年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 Thiago Lima Le嗾o;Flávio Guimar嗾es da Fonseca;;Subversion of cellular stress responses by poxviruses[J];World Journal of Clinical Infectious Diseases;2014年04期

2 刘丽;汪巨峰;李波;;天花疫苗的研究现状和进展[J];中国药事;2013年11期

3 盛媛;王浩然;胡宁宁;陈智飞;王宏宇;姜爽;周晔;李一权;李霄;金宁一;;天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株的构建及鉴定[J];中国兽医学报;2014年03期

4 肖朋朋;刘昊;阎富龙;陈智飞;朱羿龙;辛舒;王茂鹏;靖杰;鲁会军;金宁一;;重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究[J];中国病原生物学杂志;2014年07期

5 王宏宇;徐一鸣;盛媛;李一权;阎富龙;赵权;李霄;金宁一;;四联重组痘苗病毒的构建及筛选[J];中国兽医学报;2014年09期

6 姜爽;阚式绂;胡宁宁;陈智飞;李一权;周晔;李霄;孙丽丽;金宁一;;缺失TA35R基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选[J];中国兽医学报;2014年12期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 吴诗坡;基于重组腺病毒载体的烈性病原体疫苗研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 王宇航;TE3L/TE4L缺失型天坛株痘苗病毒的构建及免疫原性分析[D];吉林大学;2012年

2 杜寿文;HIV复合表位核酸和痘苗病毒载体疫苗构建及免疫原性研究[D];吉林大学;2012年

3 盛媛;基因缺失天坛株痘苗病毒弱毒载体的构建及鉴定[D];吉林农业大学;2014年

4 王宏宇;八联重组痘苗病毒天坛株的构建及筛选[D];吉林农业大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 金奇,陈悦,刘绛光,黎志良,金冬雁,侯云德;我国痘苗病毒疫苗株(天坛)25kb核苷酸序列及其与非疫苗株(WR)差异的比较[J];病毒学报;1988年04期

2 陈南海,侯云德;我国痘苗病毒天坛株与WR株基因组的差异主要分布在其外侧区[J];病毒学报;1992年04期

3 娄元梅，阮力，，朱既明;痘苗病毒毒力相关基因的研究进展[J];病毒学报;1996年01期

4 金奇,陈南海,姚二梅,黄静,侯云德;痘苗病毒天坛株基因组旁侧区结构及开放读码框架的分析[J];病毒学报;1997年01期

5 吴壮,徐军;Cre/Loxp位点重组酶系统在疾病动物模型建立中的应用[J];国外医学.呼吸系统分册;2004年04期

6 金宁一,王莉馨,罗坤,秦云龙,王宏伟,张应玖,李萍;利用中国流行株HIV-1 Gag重组痘苗病毒与核酸疫苗免疫的新程序[J];中国生物制品学杂志;2001年02期

7 王宇航;李霄;王浩然;阚式绂;王卓越;齐延新;吴娜;杜寿文;金宁一;;缺失E3L基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选[J];中国兽医学报;2011年11期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈南海，白宏东;关于痘苗病毒的毒力[J];中华实验和临床病毒学杂志;1994年01期

2 杨洁;痘苗病毒的结构特点及应用[J];国外医学.病毒学分册;1996年02期

3 ;痘苗病毒治疗癌症效果好[J];大众科技;2008年02期

4 许涤沙;刘大卫;;与接种痘苗士兵发生性接触后致痘苗病毒感染1例报告[J];中国疫苗和免疫;2010年05期

5 朱蓉;黄维金;严子林;温智恒;王文波;周艳;王佑春;俞永新;;痘苗病毒弱毒株广9株对动物的致病力研究[J];中国病毒病杂志;2011年03期

6 郝明强;田厚文;;溶瘤痘苗病毒的研究进展[J];生物技术通讯;2012年03期

7 刘强;齐香荣;朱蓉;黄维金;阮力;李保卫;邵荣光;王佑春;;利用活体成像术对痘苗病毒小鼠体内生物分布和表达的研究[J];中国病毒病杂志;2013年04期

8 ;为什么种痘 后不发痘?[J];赤脚医生杂志;1973年03期

9 方继明;痘苗病毒作为真核载体的研究现状及展望[J];病毒学报;1986年01期

10 宇文镐,侯云德,黎志良;利用大肠杆菌质粒检测与分离痘苗病毒的启动子[J];病毒学报;1987年03期

中国重要会议论文全文数据库 前7条

1 阚式绂;金宁一;李霄;刘妍;高鹏;徐晓红;贾鹏;温中梅;;实验室内痘苗病毒的危险性分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）[C];2009年

2 俞永新;;痘苗病毒广9株作为重组疫苗载体的研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

3 朱蓉;黄维金;王佑春;俞永新;;痘苗病毒弱毒株广9株的免疫原性分析[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

4 丁明孝;于文斗;于勤;翟中和;;痘苗病毒复制与中间纤维的关系[A];海峡两岸电子显微学研讨会论文专集[C];1992年

5 杜寿文;李昌;王宇航;刘存霞;任大勇;李沂;秦艳青;张轩源;金宁一;;新型痘苗病毒穿梭载体的构建及评价[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会论文集[C];2012年

6 王宇航;李霄;阚式绂;王卓越;齐延新;杜寿文;金宁一;;E3L缺失型天坛株痘苗病毒减毒载体的构建及筛选[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C];2010年

7 朱立新;刘晶;李迎春;孔玉英;STAIB Caroline;SUTTER Gerd;汪垣;李光地;;HCV E2的复杂糖化依赖于全长核心蛋白序列[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 记者 常丽君;痘苗病毒治疗癌症效果好[N];科技日报;2007年

2 赵立;痘苗病毒有助于治疗癌症[N];农村医药报（汉）;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 盛媛;基因缺失天坛株痘苗病毒弱毒载体的构建及鉴定[D];吉林农业大学;2014年

2 王宇航;TE3L/TE4L缺失型天坛株痘苗病毒的构建及免疫原性分析[D];吉林大学;2012年

3 杜寿文;HIV复合表位核酸和痘苗病毒载体疫苗构建及免疫原性研究[D];吉林大学;2012年

4 陈勇毅;携带TRAIL-IETD-IL24双基因的溶瘤痘苗病毒靶向治疗癌症的研究[D];浙江理工大学;2013年

5 王金礼;新型肿瘤靶向性溶瘤痘苗病毒VV_△TK_△N1L-RFP对小鼠4T1乳腺癌模型的治疗作用[D];郑州大学;2014年

本文编号：984831