两种提取铜绿假单胞菌外膜囊泡的方法比较

发布时间：2017-10-06 20:18

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【摘要】：目的对两种方法提取的铜绿假单胞菌(PA)的外膜囊泡(OMV)的纯度、产量及外毒素A(ETA)含量进行比较。方法分别采取超滤浓缩法和Optiprep密度梯度离心法提取PA的OMV,负染电镜检测形态及纯度;BCA法检测两种方法提取的OMV产量并用Western blotting对OMV中所含ETA进行比较;建立OMV感染人肺癌上皮细胞A549模型并检测IL-8表达水平。结果超滤浓缩法提取的OMV中存在明显的细胞碎片、鞭毛等杂质,产量为21.3μg/1010个细菌,密度梯度离心提取的OMV无明显杂质存在,产量为48.7μg/1010个细菌;相比于超滤浓缩法,密度梯度离心法提取的OMV中含有更高浓度的ETA且诱导A549细胞产生更高水平的IL-8。结论 Optiripe密度梯度离心法提取的PA的OMV的产量和纯度和ETA含量以及激活宿主细胞炎性应答的能量均高于超滤浓缩法。
【作者单位】： 重庆医科大学附属儿童医院重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室;重庆医科大学附属儿童医院新生儿科;
【关键词】： 铜绿假单胞菌 外膜囊泡 超滤浓缩 密度梯度离心 外毒素A IL-
【基金】：国家自然科学基金(81071417/H2002)~~
【分类号】：R378.991
【正文快照】： 细菌的外膜囊泡(out membrane vesicle,OMV)是细菌表面分泌的双层球形结构[1],早在20世纪60年代,OMV就被发现存在于大肠杆菌的培养基中,但很长一段时间内大家都只是把它当作细菌的一个正常的代谢产物,直到最近,OMV的生物学功能的研究才逐渐成为了热点[2]。细菌通过释放膜囊泡

【共引文献】

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10 王s，

本文编号：984817