表达HIV-1 gag重组鸡痘病毒的构建与筛选

发布时间：2017-10-07 12:41

  本文关键词：表达HIV-1 gag重组鸡痘病毒的构建与筛选

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【摘要】：构建并筛选表达HIV-1 gag蛋白的重组鸡痘病毒,并对其进行鉴定。首先设计引物通过PCR技术扩增HIV-1 gag基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的鸡痘病毒穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pTKET-HIV gag。然后将其与鸡痘病毒FPV282E4株共转染原代鸡胚成纤维细胞(CEF)进行同源重组,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记,通过噬斑筛选获得重组病毒,应用PCR,RT-PCR,Western blot方法对重组病毒进行鉴定和遗传稳定性分析。结果:通过10次噬斑筛选,PCR检测表明目的基因已整合到重组鸡痘病毒基因组中,RT-PCR,Western blot结果表明HIV-1 gag在感染细胞内成功表达且具有抗原性。连续传代20次,PCR,RT-PCR,Western blot均能检测到外源基因的整合、转录和表达,且未能扩增出FPV-TK基因,表明重组病毒遗传稳定性良好,而且病毒已经纯化。结论:成功获得表达HIV-1gag的重组鸡痘病毒,为进一步免疫试验研究奠定基础。
【作者单位】： 长春中医药大学;军事医学科学院军事兽医研究所省部共建吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;
【关键词】： 重组鸡痘病毒 HIV- gag 强型荧光蛋白 遗传稳定性
【基金】：国家科技重大专项(2012ZX10001005-006) 国家自然科学基金(81001342) 中国博士后科学基金(20110491803、2012T50859)资助项目
【分类号】：R373
【正文快照】： 中国卫生部、联合国艾滋病规划署(UNAIDS)和世界卫生组织(WHO)联合对2011年中国艾滋病疫情进行了估计,截至2011年底,估计中国存活艾滋病病毒感染者和艾滋病病人(PLHIV)78万人(62~94万人)。艾滋病已经严重影响了中国经济发展和社会稳定。但是由于HIV基因组的可塑性为其高度变异

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