利用流式分选技术富集小鼠单倍体精子细胞

发布时间：2017-10-07 14:36

  本文关键词：利用流式分选技术富集小鼠单倍体精子细胞

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【摘要】：目的:建立并完善流式分选单倍体精子细胞的方法。方法:制备小鼠睾丸单细胞悬液;活细胞DNA染料Hoechst 33342孵育细胞;利用流式细胞术分选富集单倍体圆形精子细胞或长型精子细胞;在分选富集得到的精子细胞中,通过RT-PCR方法检测多种组蛋白乙酰化修饰酶基因的表达情况;检测组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜黄素对上述基因表达的影响。结果:用Hoechst 33342染色结合流式分选方法可以高效地富集高纯度的精子细胞,还可以进一步纯化圆形精子细胞与长型精子细胞。RT-PCR结果表明,与睾丸整体组织相比,精子细胞中组蛋白乙酰化修饰酶基因的表达具有特异性,并受姜黄素处理的影响。结论:该流式分选方法提高了富集单倍体精子细胞的效率和纯度,为阐明精子形成的机制提供了简便易学、适于推广的技术平台。
【作者单位】： 上海交通大学医学院组织学与胚胎学教研室;上海市生殖医学重点实验室;上海交通大学医学院生物化学与分子细胞生物学系流式公共平台;
【关键词】： 流式分选 Hoechst 染色 单倍体精子细胞 小鼠
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973计划)(2010CB945200) 高等学校博士学科点专项科研基金(20110073120083) 上海市科委重点实验室建设基金(上海市重点学科建设基金)(10DZ2270600)~~
【分类号】：R321
【正文快照】： 哺乳动物的精子发生是受到精细调控的细胞分化事件。睾丸内精子发生的微环境主要由Sertoli细胞形成,使得生精上皮的组织具有严格的极性。在激素及微环境的作用下,精原细胞经有丝分裂、减数分裂形成单倍体圆形精子细胞,再经精子形成过程产生单倍体长型精子,之后被输送到附睾中

【共引文献】

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本文编号：988406