流行性乙型脑炎PCR检测方法的建立与应用

发布时间：2017-03-19 18:00

  本文关键词：流行性乙型脑炎PCR检测方法的建立与应用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:根据Genebank收录的流行性乙型脑炎病毒序列使用Oligo6.0软件及NCBI Blast设计特异性引物序列;不断优化PCR检测条件,采用不同反应温度,不同反应时间,不同引物浓度确定最佳PCR检测条件,建立流行性乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法。方法:以2013年6月至2013年10月间来本院就诊的21例流行性乙型脑炎患者为研究对象,并且以此期间在本院进行体检的健康人20例为健康对照组,收集所有患者和健康对照组研究对象的血液样本。采用PCR进行检测,并与ELISA方法进行比较。首先从研究对象的血液中分离流行性乙型脑炎病毒,接种BHK-21乳仓鼠肾细胞进行扩大培养,收集增殖培养后的病毒,根据Genebank收录的流行性乙型脑炎病毒序列使用Oligo6.0软件及NCBI Blast设计特异性引物序列,同时不断优化PCR检测条件,采用不同反应温度,不同反应时间,不同引物浓度确定最佳PCR检测条件。对2013年6月至2014年12月间来本院就诊的87例疑似流行性乙型脑炎患者用RT--PCR方法进行检测,检测时直接使用疑似流行性乙型脑炎患者的血清进行检测。并与流行性乙型脑炎脑脊液ELISA检测方法进行比较。检测其准确度和灵敏度。结果:PCR条件为50℃、60min,引物加入1μl时PCR反应效果最佳。结果显示,PCR检测结果阳性率为95.2%,PCR产物测序表明PCR检测准确率达到100%。临床应用测评显示PCR检测的准确率可以达到96.8%。结论:RT-PCR具有很高的诊断准确率,能够缩短诊断时间,降低诊断费用,减少患者受到的伤害,可以在临床诊断乙型脑炎方面推广应用。
【关键词】：乙型脑炎 PCR 阳性率 准确率
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.32;R440
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 研究内容11-20
• 2.1 材料11-12
• 2.1.1 研究对象11
• 2.1.2 主要试剂11-12
• 2.1.3 主要仪器12
• 2.1.4 主要溶液配制12
• 2.2 方法12-20
• 2.2.1 流行性乙型脑炎病毒的分离12-13
• 2.2.2 接种和分离病毒13-14
• 2.2.3 RT--PCR14
• 2.2.4 RT-PCR的检测14-16
• 2.2.5 PCR产物测序16-17
• 2.2.6 ELISA检测17-19
• 2.2.7 临床应用测评19
• 2.2.8 统计学处理19-20
• 第3章 结果20-24
• 3.1 RNA提取结果20
• 3.2 PCR条件的优化结果20-21
• 3.3 PCR结果21-22
• 3.4 PCR产物测序结果22
• 3.5 应用建立的RT-PCR方法与ELISA检测比较结果22
• 3.6 临床应用测评结果22-24
• 第4章 讨论24-26
• 第5章 结论26-27
• 致谢27-28
• 参考文献28-29
• 综述29-47
• 参考文献43-47

【参考文献】

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本文编号：256319