基于一种新型蛋白质芯片建立,用于梅毒和莱姆病免疫血清学筛查

发布时间：2017-04-08 03:08

  本文关键词：基于一种新型蛋白质芯片建立,用于梅毒和莱姆病免疫血清学筛查，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:建立一种新型蛋白质芯片技术,用于检测梅毒患者血清抗苍白螺旋体Ig G和Ig M抗体。方法:收集286例梅毒患者和270例无梅毒史健康者血清样本,分别作为实验组和对照组。用二硫双(琥珀酰亚氨基十一酸酯)[dithiobis(succinimidyl undecanoate),DSU]修饰金平面芯片,并对芯片进行物理表征,包括原子力电子显微镜实验(Atomic force microscope,AFM)和傅里叶红外光谱法(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)。对DSU修饰芯片进行可重复性实验,并对各项试验参数优化。用已建立蛋白质芯片方法、甲苯胺红不加热血清试验(toluidine red unheated serum test,TRUST)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(Treponema Pallidum particle assay,TPPA)对实验组和对照组样本进行检测。并对比观察该芯片检测结果与TRUST和TPPA方法的差异。结果:建立了一种DSU修饰芯片方法,并用于梅毒血清样本检测。该实验建立的蛋白质芯片平台有较高的敏感性,抗苍白螺旋体Ig G抗体检测线是0.39μg/ml;有较高的实验可重复性,芯片检测变异系数(coefficient of variation,CV)范围从4.55%到5.36%;实验特异性较强,蛋白质芯片、TPPA和TRUST方法检测梅毒患者血清中Ig G和Ig M抗体的特异性分别是100%,100%和97%;血样检测阳性率分别是99.0%,97.9%,76.2%。蛋白质芯片方法分别与TPPA和TRUST方法检测结果进行统计学χ2检验,结果分别是P0.05和P0.01。因此该蛋白质芯片方法与TPPA方法没有统计学差异,而与TRUST方法有显著性统计学差异。结论:本实验建立的蛋白质芯片可以实现同步快速检测梅毒患者血清中Ig G和Ig M抗体,具有较高的灵敏度和特异性。该蛋白芯片方法可以作为一种替代TPPA和TRUST方法检测梅毒感染。目的:建立一种蛋白质组合芯片检测技术,用于联合检测莱姆病患者血清抗伯氏疏螺旋体螺旋体Ig G和Ig M抗体,并评估患者感染的状况。方法:收集56例神经莱姆病患者血清和114例健康者血清样本,分别作为实验组和对照组。用二硫双(琥珀酰亚氨基十一酸酯)[dithiobis(succinimidyl undecanoate),DSU]修饰芯片,然后用包被有Vls E、flagellin、Osp C、三种IR6多肽(P1、P2和P3)抗原的组合蛋白质芯片,对实验组和对照组样本进行Ig M抗体和Ig G抗体联合检测。并把抗Flagellin抗原Ig M抗体芯片检测结果与传统的ELISA检测结果进行对比分析。结果:莱姆病患者血清中Ig G和Ig M抗体的特异性分别是100%,抗Vls E、Flagellin、Osp C Ig M抗体阳性率分别是60.71%,69.64%,46.43%。抗Vls E、Flagellin、Osp C Ig G抗体阳性率分别是75.00%,50.00%,35.71%。抗Vls E、Flagellin、Osp CIg M或者Ig G抗体阳性率分别增加到89.29%,82.14%,66.07%。此外,而Flagellin或Vls E或Osp C或P1或P2或P3阳性率增加到92.9%。同样的,实验结果表明,抗单一Vls E IR6多肽P1,P2,及P3的Ig M和Ig G阳性率分别是75.00%,71.43%,76.79%,抗二种同时出现的Vls E IR6多肽Ig G和Ig M抗体阳性率分别是28-48%和23-41%;抗三种同时出现的Vls E IR6多肽(P1,P2和P3)Ig G和Ig M抗体阳性率分别是25.00%和19.64%。蛋白芯片方法分别与ELISA方法检测结果进行统计学χ2检验,得结果分别是P0.05,此两种方法有显著性统计学差异。结论:1)蛋白质芯片联合检测有助于提高莱姆病诊断阳性率;2)莱姆病患者可以出现不同菌株的重复感染;3)本课题建立的莱姆病病源体组合蛋白质芯片可以替代ELISA方法,用于检测莱姆病诊断。
【关键词】：蛋白芯片 梅毒 苍白螺旋体 二硫双(琥珀酰亚氨基十一酸酯) 甲苯胺红不加热血清试验 梅毒螺旋体明胶凝集试验 蛋白质芯片 伯氏疏螺旋体抗原 神经莱姆病 酶联免疫吸附方法(ELISA)
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R759.1
【目录】：

• 一、中英文缩略词对照表7-8
• 第一部分：一种基于二硫双（琥珀酰亚氨基十一酸酯）修饰、用于梅毒螺旋体IgG和IgM抗体血清学检测新型蛋白芯片制作工艺及方法学建立8-38
• 中文摘要8-10
• Abstract10-11
• 1 前言11-12
• 2 材料与方法12-21
• 2.1 研究对象12-13
• 2.2 实验试剂及仪器13-15
• 2.2.1 金箔芯片的清洗试剂及仪器13
• 2.2.2 金箔芯片化学修饰的试剂及仪器13-14
• 2.2.3 芯片表征检测试剂和仪器14
• 2.2.4 质控实验的试剂及仪器14-15
• 2.2.5 样本检测的试剂和仪器15
• 2.3 实验方法与步骤15-20
• 2.3.1 载体的选择及表面化学处理15-16
• 2.3.2 PBS溶液和PBST-BSA溶液配制16
• 2.3.3 金箔芯片的化学修饰及表征16
• 2.3.4 抗原孵育温度-时间质控实验16-17
• 2.3.5 梅毒螺旋体重组rTpN151747 抗原质控实验17
• 2.3.6 多克隆兔抗梅毒抗原IgG抗体浓度梯度孵育质控实验17-18
• 2.3.7 Cy3标记山羊抗兔IgG抗体浓度梯度孵育质控实验18
• 2.3.8 金箔芯片的可重复性实验18-19
• 2.3.9 血清稀释度实验19
• 2.3.10 血清样本抗梅毒螺旋体rTpN151747 抗原抗体检测19-20
• 2.4 TRUST和TPPA实验方法20-21
• 2.5 统计学分析21
• 3 结果21-30
• 3.1 金箔芯片的化学修饰及表征21-22
• 3.2 抗原孵育温度-时间质控实验结果22-23
• 3.3 梅毒螺旋体rTpN151747 抗原浓度梯度孵育质控实验结果23-24
• 3.4 多克隆兔抗梅毒抗原IgG抗体浓度梯度孵育质控实验结果24-25
• 3.5 Cy3标记山羊抗兔IgG抗体浓度梯度孵育质控实验结果25-26
• 3.6 可重复性实验结果26-27
• 3.7 血清稀释度实验结果27-28
• 3.8 梅毒患者血清样本检测结果28-30
• 4 讨论30-32
• 5 结论32
• 6 对本课题的进一步设想32-33
• 参考文献33-38
• 第二部分：一种基于二硫双（琥珀酰亚氨基十一酸酯）修饰、用于莱姆病病源微生物感染抗体联合检测组合蛋白质芯片方法学建立38-59
• 中文摘要38-40
• Abstract40-42
• 1 前言42-44
• 2 材料与方法44-48
• 2.1 研究对象44-46
• 2.1.1 金箔芯片的清洗试剂及仪器44-45
• 2.1.2 金箔芯片化学修饰的试剂及仪器45
• 2.1.3 质控实验的试剂及仪器45-46
• 2.1.4 样本检测的试剂和仪器46
• 2.2 实验方法与步骤46-48
• 2.2.1 金箔芯片的清洗及修饰46-47
• 2.2.2 伯氏疏螺旋体重组Vls E、Flagellin、Osp C抗原浓度梯度孵育质控实验47
• 2.2.3 兔抗Vls E、Flagellin、Osp C抗原IgG抗体浓度梯度孵育质控实验47-48
• 2.2.4 莱姆病患者血清样本检测48
• 2.3 统计学分析48
• 3 结果48-54
• 3.1 伯氏疏螺旋体重组Vls E、Flagellin、Osp C抗原浓度孵育质控实验结果48-50
• 3.2 兔抗Vls E、Flagellin、Osp C抗原IgG抗体浓度梯度孵育质控实验50-51
• 3.3 莱姆病患者血清样本检测结果51-53
• 3.4 芯片方法与ELISA方法相关性分析53-54
• 4 讨论54-55
• 5 结论55-56
• 参考文献56-59
• 三、附录59-60
• 四、致谢60-61
• 五、综述61-69
• 参考文献65-69

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