侵袭性念珠菌感染中抗原特异性体液免疫回忆应答研究

发布时间：2017-04-26 13:00

  本文关键词：侵袭性念珠菌感染中抗原特异性体液免疫回忆应答研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景有研究显示,侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)早期,病人体内与侵袭性感染有关的优势抗原Ig G抗体水平升高,可能适用于IC的早期诊断。本研究组前期工作也发现,80%以上的IC病人可检出与侵袭性感染相关的几种优势抗原(如烯醇化酶,等)Ig G抗体水平升高,其中50%以上的病人血清抗体升高甚至早于念珠菌血培养阳性结果。念珠菌是常见的条件致病菌,经常在人体寄生或定植。人体免疫系统有很多机会受到各种念珠菌抗原的刺激而产生免疫应答。因此推测,侵袭性念珠菌感染时优势抗原的Ig G抗体水平早期快速升高,可能是正常状态下念珠菌定植引起的回忆性体液免疫应答所致,但尚无实验证据。目的用动物实验证明经历念珠菌定植或寄生的动物,在遭受侵袭性感染后,Ig G抗体水平早期快速升高,是由于特异性体液免疫记忆细胞短时大量增殖所致。并测定侵袭性念珠菌病病人血清三类抗体水平,对预测结果进一步验证。方法模拟自然情况下侵袭性念珠菌感染的情形,先建立小鼠口腔念珠菌定植模型,再经腹腔注射念珠菌孢子造成侵袭性感染。检测免疫正常和免疫抑制状态的感染小鼠脾脏白念珠菌烯醇化酶(Enolase,Eno)特异性记忆B细胞(memory B cell,Bm)的数量以及外周血Ig G、Ig M和Ig A类抗体水平,并与未经念珠菌定植的侵袭性感染小鼠的相应指标进行比较。用ELISA方法检测患者血清中Eno-Ig G、Ig M和Ig A抗体水平,并对三种类型抗体水平进行比较。结果(1)成功建立了检测Eno抗原特异性Bm的ELISPOT方法并对其进行优化。结果显示,阳性对照孔和Eno特异抗原孔的最佳细胞数分别为10,000/孔和500,000/孔,生物素化Eno的最适使用浓度为2μg/m L。(2)经历念珠菌定植的小鼠,不论是否接受免疫抑制处理,遭受侵袭性感染第7天,脾脏Eno抗原特异性Bm频数均显著多于未经历念珠菌定植的小鼠和仅经历定植而未遭受侵袭性感染的小鼠(P0.01)。(3)受到侵袭性感染第7天,经历念珠菌定植小鼠血清Eno-Ig G抗体水平显著升高。(4)Eno-Ig G抗体水平与抗原特异性Bm频数呈正相关(r=0.737,P0.01)。(5)ELISA方法检测IC患者血清三种类型抗体结果显示,Eno-Ig G抗体阳性率显著高于Eno-Ig A抗体和Eno-Ig M抗体阳性率,差异有统计学意义(χ2=29.851;P0.01;χ2=21.744;P0.01)。结论1.经历念珠菌定植的动物,在受到侵袭性感染后特异性记忆细胞短时大量增殖导致优势抗原Eno的Ig G抗体水平快速升高。2.仅有念珠菌定植而无侵袭性感染的小鼠,优势抗原Eno的Ig G抗体水平无明显变化。3.IC病人侵袭性感染早期即可在血清中检测到抗Eno抗体升高,以Ig G类抗体为主。4.优势抗原Eno-Ig G抗体测定,可用于侵袭性念珠菌病的早期血清学诊断。
【关键词】：念珠菌感染 体液免疫 记忆B细胞 ELISPOT
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.6;R519.3
【目录】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-15
• 第一章 绪论15-23
• 1.1 白念珠菌感染免疫应答的研究进展15-17
• 1.1.1 白念珠菌感染的固有免疫应答15-16
• 1.1.2 白念珠菌感染的细胞免疫应答16-17
• 1.1.3 白念珠菌感染的体液免疫应答17
• 1.2 抗体用于侵袭性念珠菌病的血清学诊断17-18
• 1.3 白念珠菌烯醇化酶18-19
• 1.4 免疫回忆应答及记忆B细胞19-20
• 1.5 检测记忆B细胞的ELISPOT技术20-21
• 1.6 本论文研究的目的、意义、方法及实验方案的设计21-23
• 1.6.1 研究目的21
• 1.6.2 研究意义21-22
• 1.6.3 研究方法及技术22
• 1.6.4 研究方案及技术路线22-23
• 第二章 念珠菌Eno特异性记忆B细胞检测方法的建立23-36
• 2.1 实验材料24-29
• 2.1.1 实验动物与饲养24
• 2.1.2 质粒与菌株24
• 2.1.3 主要试剂24-25
• 2.1.4 主要溶液配制25-28
• 2.1.5 主要仪器28-29
• 2.2 实验方法29-31
• 2.2.1 生物素化Eno抗原的制备29
• 2.2.2 BCA法定量蛋白浓度29-30
• 2.2.3 白念珠菌孢子悬液的制备30
• 2.2.4 小鼠口腔白念珠菌定植与腹腔感染30
• 2.2.5 小鼠脾淋巴细胞的收集和刺激30-31
• 2.2.6 Eno抗原特异性Bm的ELISPOT方法的建立31
• 2.2.7 Eno抗原特异性Bm的ELISPOT方法的优化31
• 2.3 实验结果31-34
• 2.3.1 小鼠口腔白念珠菌定植结果32
• 2.3.2 Eno抗原特异性Bm的ELISPOT方法的优化32-34
• 2.4 讨论34-36
• 第三章 侵袭性念珠菌病小鼠Eno特异性体液免疫检测36-49
• 3.1 实验材料36-38
• 3.1.1 实验动物与饲养36
• 3.1.2 菌株36
• 3.1.3 主要试剂36-37
• 3.1.4 主要溶液配制37
• 3.1.5 主要仪器37-38
• 3.2 实验方法38-41
• 3.2.1 白念珠菌孢子悬液的制备38
• 3.2.2 念珠菌定植38
• 3.2.3 实验动物分组38-39
• 3.2.4 免疫抑制39
• 3.2.5 白细胞计数39
• 3.2.6 念珠菌感染39
• 3.2.7 小鼠血清的采集39
• 3.2.8 Eno-IgG、IgM和IgA抗体的检测39-40
• 3.2.9 脾淋巴细胞的收集和刺激40
• 3.2.10 Eno抗原特异性Bm的ELISPOT检测40-41
• 3.2.11 统计学分析41
• 3.3 实验结果41-46
• 3.3.1 小鼠口腔白念珠菌定植结果41
• 3.3.2 免疫抑制组小鼠白细胞数变化41-42
• 3.3.3 念珠菌感染前后抗体水平变化42-44
• 3.3.4 ELISPOT检测Eno抗原特异性Bm的结果44-45
• 3.3.5 Eno-IgG抗体水平与Eno抗原特异性Bm频数的相关性分析45-46
• 3.4 讨论46-49
• 第四章 侵袭性念珠菌病患者血清不同类型抗体的检测49-57
• 4.1 实验材料49-50
• 4.1.1 主要试剂49
• 4.1.2 主要仪器49
• 4.1.3 血清标本收集49
• 4.1.4 各种无菌部位标本的病原体培养送检49-50
• 4.1.5 研究对象纳入标准50
• 4.2 实验方法50-51
• 4.2.1 ELISA测定50-51
• 4.2.2 统计学分析51
• 4.3 实验结果51-55
• 4.3.1 Eno-IgG、IgA、IgM抗体测定结果52-53
• 4.3.2 不同类型抗体阳性率的比较53
• 4.3.3 不同类型抗体动态变化53-55
• 4.4 讨论55-57
• 第五章 主要结论57-58
• 参考文献58-64
• 致谢64-65
• 攻读硕士学位期间发表的文章与参加的学术会议65
• 一、攻读硕士学位期间发表的文章65
• 二、攻读硕士学位期间参加的学术会议65

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本文编号：328471