IFN-β及IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表达分析

发布时间：2017-05-13 04:08

  本文关键词：IFN-β及IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表达分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染的清除机制目前还不十分清楚。现已知,病毒感染早期干扰素(Interferon, IFN)的产生是机体清除病毒的重要环节,而干扰素调节因子-7(Interferon regulatory factor-7, IRF-7)是IFN诱生的关键因子之一。因此本文拟通过构建急性HBV感染小鼠模型,观察IFN-β及IRF-7的mRNA和蛋白表达水平在肝组织中的变化,分析其表达变化与HBV感染的关系,以期探讨其在HBV感染清除机制中的作用。方法：1.用高压水动力法经小鼠尾静脉注射HBV基因组1.3倍体真核表达质粒(pcDNA3.1-HBV1.3)构建急性HBV感染小鼠模型,以注射空载体pcDNA3.1做对照。2.用电化学发光法检测小鼠血清中HBsAg及HBeAg水平。3.酶免疫组化法检测小鼠肝脏组织中HBsAg及HBcAg的表达。4.逆转录实时定量PCR (RT-qPCR)法检测正常未注射组(NC组)、模型组(pHBV组)及空载体组(pcDNA组)不同时间点小鼠肝脏中IFN-β、IRF-7等基因的mRNA相对表达量。5. ELISA检测各组小鼠肝脏中IFN-p蛋白含量。6. Western Blot检测各组小鼠肝脏中IRF-7的蛋白表达水平。7. SPSS 20.0统计软件作多组均数的方差分析及变量间的相关性分析。结果：1.在HBV质粒注射后,小鼠血清中HBsAg水平在第6h为阴性,然后上升,至第24h为阳性(113.89±31.06 COI) (1 COI为阳性),在第48h达到峰值(303.40±74.105 COI),随后逐渐降低；血清HBeAg水平在第24h为阳性(31.06±6.87 COI),并达峰值,然后逐渐降低。NC组及pcDNA组小鼠血清中HBsAg及HBeAg均为阴性。2.pHBV组小鼠在质粒注射后第6h即可检测到肝脏内HBsAg及HBcAg的表达,在12h时表达HBsAg或HBcAg的肝细胞阳性率达峰值(分别为20%或18%),至第5d逐渐消失。NC组及pcDNA组小鼠肝组织内]HBsAg及HBcAg均为阴性。3.pHBV组小鼠肝脏IFN- β mRNA表达在第6h升高(为NC组3.4倍),第12h达最高(为NC组66.5倍),随后下降,在6h、12h或24h时与NC或pcDNA组的差异均有显著性(P0.05)。同时,pHBV组小鼠肝脏IFN-β蛋白表达在12h升高(为NC组8.7倍),与pcD NA组与NC组相比差异有显著性(P0.05)。pcDNA组与NC组IFN-β mRNA或蛋白表达在各时间点均无显著变化(P0.05)。4.pHBV组小鼠肝脏IRF-7的mRNA及蛋白表达水平在第6h、12h、24h均显著高于pcDNA组及NC组(P0.05)。且pHBV组IRF-7mRNA或蛋白的表达在12h达到最高(为NC组5.3倍或4.4倍),随后逐渐下降,至第48h与对照组相比已无显著性差异(P0.05)。pcDNA组与NC组相比各时间点均无显著变化(P0.05)。5.pHBV组小鼠肝脏中IFN-β mRNA表达与HBsAg或HBcAg表达肝细胞的阳性率相关(p=0.01或p=0.02); IRF-7 mRNA表达与HBsAg或HBcAg表达肝细胞的阳性率相关(p0.001)；IFN-β mRNA表达与IRF-7 mRNA表达相关(p=0.004)。结论：成功构建了急性HBV感染小鼠模型,该模型肝脏组织中IFN-β和IRF-7 mRNA及蛋白表达变化与肝脏内HBV抗原表达变化趋势一致。提示肝脏内IRF-7及IFN-β可能参与了HBV的急性感染清除过程。
【关键词】：干扰素-β 干扰素调节因子-7 乙型肝炎病毒 急性感染 小鼠动物模型
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62;R-332
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一节 IFN-β在急性HBV感染小鼠模型中的表达分析15-29
• 1 材料15-18
• 2 方法18-23
• 3 结果23-29
• 第二节 IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表达分析29-36
• 1 材料29
• 2 方法29-32
• 3 结果32-36
• 全文讨论36-38
• 全文总结38-39
• 参考文献39-42
• 文献综述42-50
• 参考文献46-50
• 致谢50-51
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文51

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  本文关键词：IFN-β及IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表达分析，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：361529