肠炎沙门菌sifA基因缺失株的无痕构建及其在巨噬细胞内的增殖特性研究

发布时间：2024-07-02 05:15

　　目的本研究旨在探究sifA基因对肠炎沙门菌胞内寄生和增殖的影响,以探索肠炎沙门菌的致病机理。方法根据同源重组原理,无痕构建肠炎沙门菌C50041的sifA基因缺失株,通过蓝白斑、抗生素耐药性、PCR和基因测序方法对基因缺失株进行鉴定,并从生物学特性、胞内沙门菌增殖、sifA基因在胞内外菌中表达等方面,分析sifA基因对肠炎沙门菌的影响。结果成功构建肠炎沙门菌C50041ΔsifA,蓝白斑、抗生素耐药性、PCR和基因测序方法证明该菌株是正确的。其生长速度和生化特性没有发生改变。ΔsifA株感染巨噬细胞后,其胞内沙门菌量显著少于其野生株。sifA基因在spiC基因缺失株中表达量增加。结论肠炎沙门菌C50041ΔsifA被成功构建,其在巨噬细胞内的增殖量显著降低,sifA基因表达可能受spiC基因调控,本研究为深入探究肠炎沙门菌在细胞内增殖及sifA基因的功能奠定基础。

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

图1重组质粒中sifA基因上下游同源片段的PCR验证

PCR扩增sifA基因上下游同源片段,利用一步连接法试剂盒将sifA基因上下游同源片段连接到SalⅠ酶切的自杀质粒pGMB152载体上,形成重组自杀质粒pGMB152-ΔsifA,转化E.coli.Spy372感受态细菌,构建重组菌E.coli.Spy37(pGMB152-Δ....

图2载体特异引物pGMB152-F/RPCR验证重组菌中pGMB152-ΔsifA

图1重组质粒中sifA基因上下游同源片段的PCR验证2.1.2构建供体重组菌E.coli.χ7213(pGMB152-ΔsifA)

图3引物sifA-U-F/sifA-D-RPCR重组沙门菌结果

自杀质粒pGMB152的复制需要一种特定的蛋白,而肠炎沙门菌C50041中不含该蛋白,所以pGMB152质粒在C50041中无法复制。用不含NaCl含10%蔗糖的LB液体培养基传代后在含X-gal、IPTG的LB平板上的白色菌落有两种可能:一是同源片段双交换,sifA基因缺失的菌....

图4引物pGMB152-F/RPCR重组沙门菌结果

图3引物sifA-U-F/sifA-D-RPCR重组沙门菌结果图5C50041ΔsifA蓝白斑验证和抗生素耐药性分析

本文编号：3999732