2015南昌市活禽市场禽流感病毒污染及从业人员细胞免疫状况调查

发布时间：2017-05-31 03:14

  本文关键词：2015南昌市活禽市场禽流感病毒污染及从业人员细胞免疫状况调查，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:禽流感病毒的跨种传播和不同亚型之间重组产生新的病毒株或新的亚型引起了全球广泛的高度注意。2013年以前,国际上已报道了人感染H5N1、H7N7、H7N3、H7N2、H9N2、H10N7等禽流感病例,从2013年春季起,我国面临频发的人H7N9禽流感病例,同年12月国家卫计委宣布在江西省南昌市确诊了全球首例人感染H10N8禽流感病例。既往研究提示,活禽市场在禽流感病毒的保存、繁殖和传播中起着至关重要的作用;是禽流感病毒基因混合池,为不同亚型禽流感病毒基因重组提供有利条件;是人感染禽流感病毒的主要源头;也是预防和控制禽流感的关键所在。本研究的主要目的是通过细胞免疫学方法,探索活禽从业人群T淋巴细胞对不同流感病毒保守多肽(NP/M1)应答的频率和强度;同时,对活禽市场及其从业人员开展现况调查,了解活禽从业人群个人卫生防护行为和活禽市场禽流感病毒污染程度,以期为进一步采取公共卫生行动提供科学依据。方法:(1)流行病学调查,通过二阶段整群抽样的方法抽取南昌市辖区内76家活禽市场内全部活禽从业人群作为调查对象。利用自制问卷收集活禽市场基本情况和管理措施实施情况以及活禽从业人员的人口统计学、职业暴露和卫生习惯等信息。问卷调查结束后,采集活禽市场中的废水、禽类新鲜粪便和笼具表面涂抹擦拭物三类具有代表性的环境标本,同时采集活禽从业人员EDTA-Na抗凝血20ml的血液标本。(2)实验室检测,环境标本在采集后1周内使用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)进行A型流感病毒核酸检测,阳性标本再使用H5、H7、H9、H10特异性引物进行禽流感病毒亚型的鉴定;从业人员的血液标本采用酶联免疫斑点检测试验(ELISPOT)进行禽流感病毒特异性细胞免疫应答反应的检测。(3)数据分析,利用Epidate3.0创建数据库并进行数据的录入,应用spss13.0软件包进行统计分析。统计方法采用描述性统计分析、卡方检验和方差分析,假设检验的显著性水准设为0.05,P0.05认为有统计学意义。结果:(1)调查的76家活禽市场中,55.26%(42/76)实施一日一清洗;76.32%(58/76)实行一周一消毒,仅2家禽类摊档一月一休市;97.37%(74/76)的市场现场宰杀活禽,69.74%(53/76)存在活禽存栏过夜现象。(2)365名活禽从业人员累积职业暴露时间中位数是13年(四分位数间距:5~20年),主要暴露方式为宰杀(58.90%)和销售(43.01%),90.96%的暴露频率≥5d/周,13.97%报告近期接触过病死禽。工作中坚持每天戴口罩、带手套、每次接触禽类后洗手、每次吃饭前洗手和每次洗手时使用肥皂或洗手液的分别占14.79%、20.00%、46.58%、52.05%和47.67%。(3)474份环境标本中,75份A型流感病毒核酸阳性(阳性率15.82%),其中禽流感病毒亚型H9阳性44份,H5阳性16份,H7阳性11份,H10阳性2份。三种环境标本均有A型流感病毒阳性检出,阳性检出率差异有统计学意义(?2=12.85,P=0.002),废水阳性检出率显著高于其它标本。(4)365份活禽从业人员血液标本中,241份标本记性性T细胞对流感病毒NP/M1应答(应答阳性率66.03%)。其中104份标本的T细胞对H9亚型禽流感病毒NP/M1多肽应答,以对NP反应为主,应答频率随年龄的增长而降低,随职业暴露时间的增加先升高后下降。结论:(1)南昌市活禽市场禽流感防控措施未得到充分落实,市场禽流感病毒污染程度较为严重,提示需要进一步加强市场防控措施实施力度,降低活禽从业人群和市场顾客的感染风险。(2)南昌市活禽从业人员疫苗接种率低,每周接触活禽频率高,累计接触时间长且个人卫生防护措施采用率较低,存在发生感染的隐患,公共卫生工作者应加强对该人群的宣传教育,提高其个人防护意识。(3)南昌市活禽从业人群对H9亚型禽流感病毒和季节性流感病毒存在交叉反应的记忆性T细胞免疫应答。年龄和职业暴露时间是T细胞对H9亚型禽流感病毒NP/M1肽段应答频率的影响因素。
【关键词】：活禽市场 禽流感 活禽从业人群 酶联免疫斑点检测试验
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R511.7
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略词表10-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-20
• 2.1 流行病学调查13-15
• 2.1.1 调查目的13
• 2.1.2 调查对象13
• 2.1.3 调查方法13-14
• 2.1.4 标本的采集与处理14
• 2.1.5 组织与实施14-15
• 2.2 RT-PCR实验15-16
• 2.2.1 主要试剂15
• 2.2.2 主要仪器15
• 2.2.3 核酸抽提15-16
• 2.2.4 禽流感病毒核酸检测16
• 2.3 ELISPOT实验16-19
• 2.3.1 主要仪器16-17
• 2.3.2 主要试剂17
• 2.3.3 抗原肽库的选择17
• 2.3.4 PBMCs复苏17-18
• 2.3.5 PBMCs流式细胞计数18
• 2.3.6 ELISPOT实验18-19
• 2.4 统计分析19
• 2.5 质量控制19-20
• 第3章 结果20-35
• 3.1 活禽市场基本情况20-22
• 3.1.1 活禽市场基本情况20-21
• 3.1.2 活禽市场中禽类摊档情况21-22
• 3.2 活禽从业人群特征22-25
• 3.2.1 人口学特征22-23
• 3.2.2 活禽职业暴露情况23-24
• 3.2.3 个人卫生行为24-25
• 3.3 活禽市场禽流感病毒污染状况25-27
• 3.3.1 活禽市场禽流感病毒检测情况25-26
• 3.3.2 不同类型标本禽流感病毒检出情况26-27
• 3.4 ELISPOT实验结果27-35
• 3.4.1 T细胞对不同亚型流感病毒NP/M1多肽的应答28-30
• 3.4.2 T细胞对流感病毒NP/M1多肽的交叉反应强度分析30
• 3.4.3 年龄与T细胞对禽流感病毒NP/M1多肽的应答的分析30-32
• 3.4.4 暴露时间与T细胞对禽流感病毒NP/M1多肽的应答分析32-34
• 3.4.5 环境污染与T细胞对禽流感病毒NP/M1多肽的应答分析34-35
• 第4章 讨论35-39
• 4.1 活禽市场禽流感病毒污染及从业人员分析35-37
• 4.2 活禽从业人员对流感病毒MP/M1多肽的T细胞免疫研究37-39
• 第5章 结论与展望39-40
• 5.1 结论39
• 5.2 进一步工作方向39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-46
• 附录A46-48
• 附录B48-50
• 攻读学位期间的研究成果50-51
• 综述 职业人群高致病性禽流感的流行病学研究进展51-60
• 主要参考文献57-60

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