二丁颗粒抗肠道病毒71型作用的体内外实验研究

发布时间：2017-06-03 01:09

  本文关键词：二丁颗粒抗肠道病毒71型作用的体内外实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的：肠道病毒71型（enterovirus71， EV71）为小RNA病毒科肠道病毒属的成员，是引起手足口病（Hand, Foot and Mouth Disease，，HFMD）的主要病原体。EV71型手足口病常会并发神经源性肺水肿、无菌性脑膜炎、脑干脑炎、心肌炎、急性驰缓性麻痹等中枢神经系统疾病，致残率和死亡率较高。目前尚无行之有效的抗EV71病毒药物、疫苗和治疗手段。二丁颗粒是由紫花地丁、半边莲、蒲公英和板蓝根4味药材制成的中药复方制剂，具有清热解毒的功能。本研究将对其体内外抗EV71作用、免疫调节作用等方面进行研究。 材料及方法：体外实验：采用MTT比色法测定二丁颗粒及阳性对照药物（利巴韦林）对Vero细胞的毒性作用，非线性回归构建各药物剂量与毒性效应关系曲线，计算最大无毒浓度（TC0）和半数毒性浓度（TC50）；MTT比色法测定二丁颗粒对EV71致细胞病变（CPE）的抑制作用，计算最大无毒浓度下，各药物对病毒的抑制率。体内实验：采用腹腔注射肠道病毒71型感染5日龄Balb/c乳鼠，建立EV71实验动物模型，并分别用二丁颗粒和利巴韦林进行治疗，连续观察14天，统计各组体重和临床评分，计算各组死亡率和生命延长率。于感染后6天，取乳鼠血清和肌肉组织，流式液相多重蛋白定量技术检测各组乳鼠血清中炎症因子的含量；Real-time PCR检测肌肉组织中EV71的病毒载量；HE染色进行肌肉组织病理学检测。 实验结果及结论：体外实验结果显示，二丁颗粒对Vero细胞最大无毒浓度（TC0）为2.56mg/ml，半数毒性浓度（TC50）为16.74mg/ml；利巴韦林颗粒对Vero细胞最大无毒浓度（TC0）为1.58mg/ml，半数毒性浓度（TC50）为18.17mg/ml。二丁颗粒在最大无毒浓度下，对EV71抑制作用不明显，差异无统计学意义。体内实验结果显示，二丁颗粒各剂量组可不同程度提高EV17模型乳鼠的生存率和生存时间；增加体重，降低临床评分；降低乳鼠血清中IL-6、TNF-α、IFN-γ、MCP-1的含量，减轻炎症反应，改善组织病理。二丁颗粒治疗并不能明显抑制EV71在乳鼠肌肉中扩增，模型乳鼠生存状态和生理指标的改善可能与二丁颗粒抑制细胞炎症因子的免疫调理作用有关。
【关键词】：肠道病毒71型 二丁颗粒 病毒载量 炎症因子 免疫调节
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文缩写词表8-12
• 第一章 绪论12-25
• 1. 肠道病毒 71 型病原学基础12-16
• 1.1 肠道病毒 71 型的生物学性状12-13
• 1.2 EV71 所致手足口病概述13-14
• 1.3 EV71 流行病学14-15
• 1.4 EV71 致病机制及病理特征15-16
• 2. EV71 动物模型的研究进展16-19
• 2.1 非人灵长类动物模型16-17
• 2.2 小鼠模型17-19
• 3. 抗 EV71 药物的研究进展19-25
• 3.1 结构蛋白抑制剂19-20
• 3.2 非结构蛋白抑制剂20-22
• 3.3 核苷酸类似物22
• 3.4 RNA 干扰22
• 3.5 免疫调节药物22-23
• 3.6 药用植物提取物23-24
• 3.7 其他24-25
• 第二章 体外实验研究25-30
• 1 实验材料25-26
• 1.1 药物25
• 1.2 细胞株25
• 1.3 病毒株25
• 1.4 主要设备与试剂25-26
• 2 实验方法26-28
• 2.1 细胞培养26
• 2.2 病毒 TCID50的测定26
• 2.3 药物毒性测定26-27
• 2.4 药物对病毒致细胞病变作用的影响27-28
• 3 结果28-30
• 3.1 EV71 的 TCID5028
• 3.2 药物毒性测定28-29
• 3.3 药物对病毒致细胞病变保护作用29-30
• 第三章 体内实验研究30-44
• 1 实验材料30-31
• 1.1 主要设备与试剂30
• 1.2 引物设计与合成30
• 1.3 实验动物30-31
• 2 实验方法31-36
• 2.1 实验动物分组及给药剂量31
• 2.2 建立 EV71 乳鼠感染模型31
• 2.3 给药方法31
• 2.4 二丁颗粒对模型鼠生存状态的影响31-32
• 2.5 流式液相多重蛋白定量技术（CBA）检测乳鼠血清中炎症因子32-33
• 2.6 Real-time PCR 检测肌肉组织中病毒 RNA 相对表达量33-36
• 2.7 组织病理学检测36
• 3 结果36-44
• 3.1 乳鼠生存率与生存时间36-37
• 3.2 乳鼠体重变化37-38
• 3.3 乳鼠临床评分38-39
• 3.4 乳鼠血清中炎症因子检测39-42
• 3.5 乳鼠肌肉组织中 EV71 病毒载量42-43
• 3.6 乳鼠肌肉组织病理学检测43-44
• 第四章 讨论44-45
• 第五章 结论45-46
• 参考文献46-56
• 作者简介56-57
• 致谢57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 贾红慧;袁洁;勾P;李代英;;二丁颗粒的抑菌抗炎和免疫调节作用[J];华西药学杂志;2006年05期

2 王琦;王子军;;2008年中国手足口病流行特征分析[J];疾病监测;2010年03期

3 高永荣;;人血丙种球蛋白治疗手足口病合并脑炎的疗效分析[J];中国实用神经疾病杂志;2013年22期

4 杨秀亭;;重症手足口病分组监护治疗90例分析[J];中国实用医药;2011年13期

5 张迎秋;赵春晖;杨倬;;3,4-二羟基苯乙酸甲酯对肠道病毒71型在人横纹肌肉瘤细胞中复制的抑制[J];药学学报;2012年09期

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本文编号：416928