猪链球菌的分离与鉴定

发布时间：2015-03-03 17:33

庄晓薇
（山东省临朐县畜牧局，山东 临朐  262600）

摘要：对16份猪场病猪病料进行病原菌分离、血清学鉴定、致病力试验、保护力试验、细菌回收试验、药敏试验，结果表明，该病原菌为II 型猪链球菌，引起关节炎的猪链球菌较引起败血症的猪链球菌致病力弱；该菌对头孢菌素、青霉素高度敏感。
关键词：猪链球菌；分离；鉴定
中图分类号：Ｓ852.61+1               文献标识码：A                 文章编号：1007－273X（２０１３）０8-0013-03

猪链球菌 (Streptococcosis suis) 是引起猪的多种疾病的病原菌之一，该病原菌在养猪业发达国家如美、英、荷兰及爱尔兰等国常有发生。我国于 1958 年就有猪链球菌病的报道，1976 年我国南方几省曾一度广泛流行，给我国养猪业带来了很大危害［1］。
    目前发现的猪链球菌荚膜型已超过 30 种。该病一年四季均可发生，但以 4~10 月份发生较多。常为地方性流行，多呈败血性，短期波及全群，如不进行防治，则发病率、病死率很高，慢性常为地方性散发性传染［2］。
1  猪场发病情况
    2012 年 4 月，山东省临朐县某生猪繁育场仔猪流行关节炎及败血症，发病猪多为 2~6 周龄仔猪。无菌采取病猪的关节液、肝、脾、肺及肠系膜淋巴结，经实验室分离鉴定，证实为II 型猪链球菌。
2  材料与方法
2.1  材料
2.1.1  病料  无菌采取该生猪繁育场患关节炎病猪的关节液 8 份，分别编号为 1-8 号；无菌采取患败血症猪的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结 8 份，分别编号为 9~16 号。
2.1.2  试剂   试验所用的各种糖均购自上海化学试剂二厂，批号为 2010~2012 年不等。
2.1.3  培养基  绵羊鲜血平板、匹克氏增菌液、10 ml/L猪血清肉汤及各种糖培养基按常规方法制备。
2.1.4  试验抗原   猪链球菌诊断血清与平板凝集抗原均购自中国兽药鉴察所，批号为 990725。
2.1.5  药敏纸片 购自广东省某军区后勤部，批号 20000312。
2.1.6  试验动物  健康小白鼠 (30~35 g) 50 只，购自青岛农业大学动物科技学院。
2.2  方法
2.2.1  病原分离  将所采病料分别涂片，革兰氏染色镜检，然后分别接种于鲜血琼脂平板。37 ℃ 需氧培养 24 h 后，挑取可疑菌落接种于匹克氏增菌液，37 ℃ 培养 24 h 后，革兰氏染色，显微镜检查，再接种于血清肉汤，纯化后放置 4 ℃，冷藏备用［3］。
2.2.2  分离菌株的鉴定
    （1）生化试验。随机抽取上述分离菌血清肉汤培养物 3#、8#、13#、15#，分别接种于蔗糖、山梨醇、棉子糖、葡萄糖、水杨苷、马尿酸钠培养基，37 ℃培养24 h 后，观察其对糖的利用情况［4］。
    （2）血清学鉴定。将 3#、8#、13#、15# 菌经血清肉汤培养 8 h，通过 3 000 r/min 离心 10 min，PBS 洗涤 2 次，用pH 7.2 的 0.01mol/L PBS制成 1:10~1:20倍稀释的细菌悬液。取 1 滴上述细菌悬液与适当的抗血清在洁净玻片上混匀，立即观察凝集现象。同感；洁霉素和卡那霉素中度敏感；而对土霉素、链霉素、庆大霉素具有耐药性。
4  讨论
过去屡有败血型猪链球菌的报道，而关于集约化养猪场关节炎型链球菌病的报道较少。本次试验从患关节炎猪的关节液中成功分离出了猪链球菌。另外，该种猪场约有60% 的仔猪流行关节炎，严重者可发生败血症而死亡，给种猪场造成巨大的经济损失。所以，研究该病可为生产中防制该病提供理论依据。
病猪的鼻液、尿液、肌肉、内脏和关节内均带有病原体，建议首先应加强对健康猪的免疫。另一方面，在发病后对病猪和健康猪进行隔离，根据实验室药敏试验结果配合药物治疗，，建议用头孢菌素、青霉素、洁霉素等药物治疗。该种猪繁育场采纳我们的建议，首先对所有的未发病仔猪用灭活疫苗免疫接种，对已发病的猪用青霉素等药物配合治疗，另外注意卫生管理。该病得到有效的控制。
5  结论
引起猪关节炎的猪链球菌的致病力较小，而引起败血症的猪链球菌的致病力较强。但通过生化试验和血清学鉴定，它们又是同种细菌且血清型也相同。同种血清型的猪链球菌的致病力之间的差异还有待于进一步研究。
参考文献：
［1］ 杨本升，刘玉斌，苟仕金，等． 动物微生物学［M］． 长春:吉林科学技术出版社，1995.
［2］ 黄毓茂,黄引贤．2型猪链球菌的血清学鉴定［J］．中国兽医学报，1995，15（1）：63-65
［3］ 李健强,李大金.兽医微生物学实验实习指导［M］. 西安：陕西科学技术出刊社，1999.
［4］ 张彦明，贾靖国，刘安典．动物性食品卫生检验技术［M］. 西安．西北大学出版社，1996.
［5］ 蔡宝祥.家畜传染病学［M］． 北京：中国农业出版社，1998.
［6］ 甘肃农业大学.兽医微生物学［M］. 北京：中国农业出版社，1982.
［7］ 刘荣标．兽医微生物学（上）［M］. 台北：艺轩图书出版社，1984.
［8］ 郑明球．家畜传染病学实验指导［M］． 北京：中国农业出版社，1999.

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本文编号：16212