维生素C通过影响DNA甲基化对牛颗粒细胞细胞周期及凋亡的作用

发布时间：2017-04-02 12:19

  本文关键词：维生素C通过影响DNA甲基化对牛颗粒细胞细胞周期及凋亡的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：在哺乳动物的卵巢中,细胞周期的有序进行可以保护细胞避免凋亡。颗粒细胞作为卵泡内非常重要的一种体细胞,通过间隙连接或旁分泌等方式对卵母细胞的发育及成熟起支持、调控和营养等作用。维生素C(Vitamin C,VC)又称L-抗坏血酸,作为一种重要的维生素,在防止细胞老化、抑制细胞凋亡中具有重要作用。最新研究发现,维生素C不仅能有效清除细胞内的活性氧自由基(Reactive Oxygen Species,ROS)及其产物,还可通过参与DNA去甲基化及组蛋白修饰过程,进而调控细胞内表观遗传修饰。研究表明,维生素C可以抑制牛颗粒细胞凋亡,但其作用机制除与维生素C可去除细胞内ROS外,是否与维生素C通过影响相关基因DNA甲基化及细胞周期有关尚不明确。因此,本研究首先分离牛颗粒细胞,并采用ITS+培养体系进行体外培养,采用流式细胞术明确维生素C及羟基脲(Hydroxyurea,HU)最适添加浓度、维生素C对细胞周期的作用和维生素C及HU对细胞内ROS水平的影响。结果表明,随着维生素C的添加浓度的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐降低,在细胞可以接受的添加浓度范围内,100μM的维生素C可有效抑制颗粒细胞凋亡;1 m M的HU可以显著抑制颗粒细胞周期的进行。而在添加HU时同时添加维生素C,可以有效缓解HU对颗粒细胞细胞周期的抑制作用,而维生素C的这种促进细胞周期进行、抑制颗粒细胞凋亡的作用并非是通过降低细胞内ROS水平实现的。随后,本研究进一步通过q RT-PCR方法检测了维生素C对细胞周期和细胞凋亡相关基因m RNA表达水平的影响,再通过亚硫酸氢盐测序(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)方法检测维生素C对其中关键基因DNA甲基化水平的影响,以探讨维生素C对颗粒细胞周期及细胞凋亡的作用机制。结果显示,维生素C可通过调节CDK4、CDK6、CCNA、CCNB、P21和RRM1基因的表达对促进颗粒细胞周期的正常进行,并通过调控BCL2、BAX和P53的表达抑制细胞凋亡。而在此过程中,CCNB和CDK4的DNA甲基化水平受到维生素C的影响。本研究为进一步了解维生素C的生物学功能、有效利用维生素C提供了新思路,并对深入解析颗粒细胞凋亡的机制提供了理论依据。
【关键词】：维生素C 细胞凋亡 细胞周期 DNA甲基化
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S816
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩写词表10-12
• 前言12-13
• 第一篇 文献综述13-27
• 第1章 维生素C的研究进展13-18
• 1 维生素C概述13-14
• 2 维生素C的功能14-17
• 3 展望17-18
• 第2章 颗粒细胞凋亡及其相关机制18-24
• 1 颗粒细胞及其对卵母细胞的作用18-19
• 2 颗粒细胞凋亡及其相关机制19-24
• 第3章 细胞周期的研究进展24-27
• 1 细胞周期概述24
• 2 细胞周期相关蛋白及其调控作用24-27
• 第二篇 研究内容27-60
• 第1章 维生素C对牛颗粒细胞细胞周期的影响以及在颗粒细胞凋亡中的作用27-39
• 1 材料与方法27-31
• 2 结果31-36
• 3 讨论36-38
• 4 小结38-39
• 第2章 维生素C对牛颗粒细胞细胞周期和凋亡相关基因表达水平变化及DNA甲基化水平变化的影响39-60
• 1 材料与方法39-48
• 2 结果48-57
• 3 讨论57-58
• 4 小结58-60
• 结论60-61
• 参考文献61-73
• 导师简介73-74
• 作者简介74-75
• 致谢75

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本文编号：282503