γ-干扰素对仔猪耳廓微循环相关因子蛋白质组学研究

发布时间：2017-04-09 11:26

  本文关键词：γ-干扰素对仔猪耳廓微循环相关因子蛋白质组学研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：微循环障碍是疾病的一个重要表现。众多医学相关报道以鼠兔为动物模型研究微循环障碍的成因。但目前尚未见有关猪耳廓微循环障碍形成机理的研究报道。IFN-γ作为重要的前炎性因子,在微循环障碍发展过程中扮演着重要的角色。本实验以仔猪耳廓为研究对象,应用蛋白质组学方法,探讨了γ-干扰素对猪耳微循环相关因子变化的影响。方法:(1)对仔猪耳尖静脉分别注射IFN-γ或等体积的生理盐水,取耳尖组织,采用iTRAQ蛋白质组学方法,分析其蛋白质组学差异;(2)根据蛋白质组学结果,对其中表达差异明显的蛋白质用免疫组织化学方法确定其在组织中的定位,并对蛋白质组学结果进行验证。结果:(1)在2组样品中共同鉴定到蛋白质2444种,其中122种蛋白质在实验组中表现为显著的表达上调,102种蛋白质表现为显著下调;(2)2组样品间的差异蛋白在机体内执行的主要功能是血小板激活、脱氧核糖核酸酶活性调控和多细胞生物过程的正调控;(3)差异表达蛋白中显著富集的KEGG通路是植物病原菌互作过程、补体和凝血级联反应和NOD样受体信号通路。(4)内皮型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮定位在血管及毛囊的毛细血管网上,核因子-κB定位在毛囊的内根鞘和外根鞘,蛋白激酶C则定位在周围疏松结缔组织中;免疫组化结果与蛋白组学结果相符。本研究揭示了IFN-γ对猪耳廓微循环作用的可能机制,为后续研究猪耳廓微循环障碍形成机理提供理论依据。
【关键词】：γ-干扰素 微循环 蛋白质组学 蛋白激酶C 核因子-κB
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1 前言9-16
• 1.1 微循环的形态结构和功能9-10
• 1.2 IFN-γ的研究进展10-13
• 1.2.1 IFN-γ的产生10-11
• 1.2.2 IFN-γ受体和信号转导11-12
• 1.2.3 IFN-γ的生物活性12-13
• 1.3 微循环相关因子13-14
• 1.3.1 NF-κB与微循环的关系13
• 1.3.2 PKC与微循环的关系13-14
• 1.3.3 NOS与微循环的关系14
• 1.4 基于iTRAQ的蛋白质组学技术14-15
• 1.5 研究目的与意义15-16
• 2 材料与方法16-23
• 2.1 组织样品16
• 2.2 主要试剂16-17
• 2.3 主要仪器17
• 2.4 蛋白质组学检测17-22
• 2.4.1 组织总蛋白提取17-18
• 2.4.2 BCA法测定蛋白质浓度18
• 2.4.3 SDS-PAGE18-19
• 2.4.4 还原烷基化和酶解19
• 2.4.5 iTRAQ标记19-20
• 2.4.6 高pH UPLC第一维分离20-21
• 2.4.7 液相串联质谱21
• 2.4.8 搜库21-22
• 2.5 HE染色22
• 2.6 免疫组织化学22-23
• 2.6.1 免疫组化染色22-23
• 2.6.2 免疫组化结果判断23
• 2.7 数据分析统计23
• 3 结果与分析23-38
• 3.1 蛋白质浓度测定23-24
• 3.2 蛋白质谱鉴定及表达差异分析24-29
• 3.3 蛋白质功能聚类分析29-31
• 3.4 KEGG注释通路分析31-32
• 3.5 差异蛋白GO分析32-35
• 3.6 差异蛋白KEGG注释通路分析35
• 3.7 HE染色35
• 3.8 免疫组化结果35-38
• 4 讨论38-44
• 4.1 耳尖组织中的总蛋白38-40
• 4.2 差异蛋白功能和通路分析40-42
• 4.3 免疫组化结果42-43
• 4.4 进一步工作建议43-44
• 全文总结44-45
• 致谢45-46
• 参考文献46-54
• 附录54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 杨丽华;苏莹;胡万芹;;核因子kappa B与卵巢上皮癌血管生成及复发的关系研究[J];中国医药指南;2013年09期

2 罗丽珊;孙嘉;;微循环障碍相关细胞信号通路的研究进展[J];微循环学杂志;2013年01期

3 鲜尽红;何莉;汪正清;;补体级联反应在脑缺血/再灌注炎症损伤中的作用[J];创伤外科杂志;2011年06期

4 夏伦斌;王新华;连宏军;薄新文;钟发刚;;γ干扰素及其在动物疾病防控中的应用[J];动物医学进展;2007年05期

5 王汝琨;林慧芳;;410例健康人甲皱微循环观察[J];河南中医学院学报;1978年04期

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本文编号：295176