新疆不同地区牛粪源大肠杆菌O157:H7分离鉴定及毒性研究

发布时间：2021-01-05 06:23

　　肠出血性大肠杆菌能引起人的出血性腹泻和肠炎，以O157:H7血清型为代表菌株。为了解新疆三个地区不同牛场大肠杆菌O157:H7的流行情况，对新疆伊犁、塔城、阿克苏三个地区牛场采集的粪样进行大肠杆菌O157:H7的分离鉴定。样品经大肠杆菌肉汤培养基增菌、免疫磁珠富集后，用山梨醇麦康凯平板和4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基进行初步筛选，选用菌体O抗原基因和鞭毛H抗原基因对筛选后疑似大肠杆菌O157:H7菌株进行PCR扩增，同时结合生化方法进行符合性试验。最终从新疆三个地区不同牛场的319份粪便样品中分离到10株肠出血性大肠杆菌O157:H7，检出率为3.13％。本研究结果表明，部分被检牛场存在被大肠杆菌O157:H7威胁的可能性。本研究以大肠杆菌O157:H7的O抗原基因、鞭毛H抗原基因、黏附素基因和志贺样毒素为特异基因片段为扩增对象，目的片段选取片段大小不同的5对引物，通过反复摸索反应温度，时间等一系列反应参数后，确定了最佳反应体系。本试验用多重PCR方法检测大肠杆菌O157:H7是可行的。通过对感染大肠杆菌O157:H7志贺样毒素小鼠临床反应、致死率、血液生化指标的观察及检测，初步分析该病... 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

E.coliO157:H7菌落形态

扩增后的 PCR 产物用 1％琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像分析系统观察结果。2.1.6.5 生化鉴定根据 E. coli O157:H7 的生理生化特性，对于 PCR 鉴定 rfbe 基因扩增出 500 bp 条带fliC 基因扩增出 625 bp 条带的菌株用肠杆菌科细菌生化编码鉴定管进行鉴定，验证 PC检测结果。2.2 试验结果2.2.1 SMAC 平板选择性培养结果标准 E. coli O157:H7 在 SMAC 平板上的形态为圆形、光滑、较小的无色菌落（图2-1）；标准 E. coli 在 SMAC 平板上菌落形态为红色菌落。通过细菌在 SMAC 上的菌落形态初步筛选出疑似 E. coli O157:H7 菌株。

2-1）；标准 E. coli 在 SMAC 平板上菌落形态为红色菌落。通过细菌在 SMAC 上的菌落形态初步筛选出疑似 E. coli O157:H7 菌株。图2-1 E. coli O157:H7菌落形态 图2-2 E. coli菌落形态 图2-3 分离菌株SMAC检测板2.2.2 MUG 试验结果97﹪ E. coli 含有葡萄糖醛酸苷酶，MUG 作为培养基可被水解，水解后释放的 4-甲基伞形酮在紫外灯照射下产生蓝白色荧光（图 2-4）。SMAC 平板筛选出的疑似 E. coliO157:H7 菌株进行 MUG 试验后总计 118 株细菌不产生蓝白色荧光。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2958191