褪黑素对牛精液品质、卵母细胞体外成熟及体外发育能力影响的研究
本文关键词：褪黑素对牛精液品质、卵母细胞体外成熟及体外发育能力影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：体外受精技术(in vitro fertilization,IVF)是体外胚胎生产的重要途径。提高体外胚胎生产效率能够为畜牧业生产提供更多数量成本更低的胚胎来源。本文研究了褪黑素对牛冷冻-解冻精液品质、卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响及其可能的作用机制。研究结果如下:1、研究了不同浓度褪黑素(0、10-7、10-5、10-3M)对牛冷冻精液品质及体外胚胎发育能力的影响。结果显示:(1)10-5M和10-3M褪黑素处理显著降低了精子细胞内的ROS水平(9.9、6.5 vs 15.0),(P0.05);质膜、线粒体膜和顶体完整的精子比例显著提高(61.3%vs 45.3%、65.5%vs 47.2%、70.9%vs 45.8%),(P0.05),精液品质得到明显改善。(2)与对照组相比,10-3M褪黑素处理精子能显著提高牛IVF胚胎的囊胚形成率(43.0%vs 34.3%),(P0.05);褪黑素处理组与对照组之间的囊胚细胞数没有显著差异(P㧐0.05),但10-3M褪黑素处理显著降低了囊胚凋亡细胞比例(3.7%vs 6.0%),(P0.05)。(3)10-3M褪黑素处理显著抑制牛IVF胚胎中促凋亡基因Bax、caspase-3的表达,而抗凋亡基因BCL-2、XIAP和抗氧化酶基因CAT的表达显著上调(P㩳0.05)。2、研究了不同浓度褪黑素(0、10-11、10-9、10-7M)对牛卵母细胞体外成熟及体外胚胎发育能力的影响。结果显示:(1)与对照组相比,10-11M和10-9M褪黑素处理能够显著提高牛卵母细胞第一极体排出率(82.3%、79.3%vs 74.7%),(P㩳0.05);10-9M褪黑素处理组中线粒体均匀分布的卵母细胞比例显著高于对照组和10-11M褪黑素处理组(74.1%vs 60.0%、64.8%),(P㩳0.05);在不同浓度的褪黑素处理组中,皮质颗粒在外周和皮质区分布的卵母细胞比例均显著高于对照组(P㩳0.05),以10-9M褪黑素处理比例最高(69.1%vs 54.0%)。(2)不同浓度的褪黑素处理卵母细胞对牛IVF胚胎的卵裂率没有显著影响(P㧐0.05),但囊胚形成率均显著高于对照组(38.6%、42.5%、37.3%vs 32.8%),(P㩳0.05);褪黑素处理组与对照组之间的囊胚细胞数没有显著差异(P㧐0.05),但囊胚凋亡细胞比例均显著下降(P㩳0.05),其中10-9M褪黑素处理凋亡细胞比例最低(4.5%vs 7.5%)。(3)与对照组相比,10-9M褪黑素处理显著下调促凋亡基因caspase-3的表达(P㩳0.05),而抗凋亡基因BCL-2、XIAP以及抗氧化酶基因CAT和GPx4的表达水平显著增加。
【关键词】：牛 褪黑素 精子 卵母细胞 胚胎发育
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S823
【目录】：
- 摘要4-5
- Summary5-10
- 第一章 文献综述10-21
- 1 褪黑素的生理功能及作用机制10-14
- 1.1 褪黑素概述10
- 1.2 褪黑素生物合成、分泌与代谢10-12
- 1.2.1 褪黑素合成途径10-11
- 1.2.2 褪黑素代谢途径与代谢产物11-12
- 1.3 褪黑素生物学作用12-14
- 1.3.1 褪黑素的重要生理功能12-13
- 1.3.2 褪黑素抗氧化作用及其机制13-14
- 2 褪黑素对家畜繁殖的影响及其应用14-18
- 2.1 褪黑素对公畜繁殖机能的影响15-16
- 2.1.1 褪黑素对精子生成的保护15-16
- 2.1.2 褪黑素在冷冻精液中的应用16
- 2.2 褪黑素对母畜繁殖机能的影响16-18
- 2.2.1 褪黑素对卵泡发育的影响16-18
- 2.2.2 褪黑素在卵母细胞成熟中的应用18
- 3 褪黑素在体外受精中的应用18-19
- 4 本实验的目的和意义19-21
- 第二章 褪黑素对牛精液品质及体外发育能力的影响21-36
- 1 材料与方法22-28
- 1.1 试验材料22
- 1.2 主要试验仪器22
- 1.3 主要试剂及配制22-24
- 1.4 试验方法24-28
- 1.4.1 精液品质检测24-26
- 1.4.2 体外受精26
- 1.4.3 胚胎TUNEL检测26
- 1.4.4 荧光定量PCR26-28
- 1.4.5 数据处理28
- 2 结果与分析28-33
- 2.1 MT处理对精液品质的影响28-31
- 2.1.1 MT处理对精子活率的影响28
- 2.1.2 MT处理对精子ROS水平的影响28-29
- 2.1.3 MT处理对精子质膜完整率的影响29
- 2.1.4 MT处理对精子顶体完整率的影响29-30
- 2.1.5 MT处理对精子线粒体膜完整率的影响30-31
- 2.2 MT处理精子对体外受精胚胎发育的影响31-32
- 2.3 MT处理精子对IVF胚胎相关基因表达的影响32-33
- 3 讨论33-35
- 4 小结35-36
- 第三章 褪黑素对牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响36-45
- 1 材料与方法36-38
- 1.1 试验材料及试验仪器36
- 1.2 主要试剂及配制方法36-37
- 1.3 试验方法37-38
- 1.3.1 卵母细胞成熟质量检测37
- 1.3.2 体外受精37
- 1.3.3 胚胎TUNEL检测37
- 1.3.4 荧光定量PCR37
- 1.3.5 数据处理37-38
- 2 结果与分析38-43
- 2.1 不同浓度MT对卵母细胞成熟的影响38-40
- 2.1.1 对核成熟的影响(第一极体排出率)38
- 2.1.2 对线粒体分布的影响38-39
- 2.1.3 对皮质颗粒(CG)分布的影响39-40
- 2.2 MT处理卵母细胞对体外受精胚胎发育的影响40-41
- 2.3 MT处理卵母细胞对体外受精胚胎基因表达的影响41-43
- 3 讨论43-44
- 4 小结44-45
- 全文结论45-46
- 参考文献46-54
- 致谢54-55
- 导师简介55-56
- 个人简介56-57
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 李晓霞;曹平华;禹学礼;栗颖华;;添加褪黑素对牛精液品质的影响[J];中国畜牧兽医;2013年04期
2 高超;田秀芝;张璐;徐静;汪锋;卓志勇;戴蕴平;刘国世;;外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响[J];中国农业科学;2011年17期
3 杜立银;曹少先;郭炜;王海英;刘铁铮;;褪黑素在猪精液保存中的抗氧化作用[J];江苏农业学报;2009年02期
4 金一;陈宠霞;王晓明;魏世宝;;含海藻糖稀释剂增补EDTA对猪精子冷冻能力的影响[J];中国兽医学报;2007年01期
5 何炜;李晓晔;石鑫;侯建伟;洪良健;张生勇;;褪黑素的生理活性研究进展[J];医药导报;2006年06期
6 杨志红,钟历勇;褪黑素对免疫功能影响的研究进展[J];同济大学学报(医学版);2003年04期
7 丁长海,魏伟,徐叔云;松果体和褪黑激素对大鼠脾淋巴细胞增殖和地诺前列酮产生的影响(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;1995年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 赵宪林;多种抗氧化剂对动物精子品质影响的研究[D];西北农林科技大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 朱华;褪黑素对人胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响[D];苏州大学;2009年
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本文编号：312101
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