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布鲁氏菌感染条件下mCD14 knockdown RAW264.7稳定细胞系microRNA表达分析

发布时间:2022-07-13 10:43
  布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的传染病,不仅感染多种动物,而且对人类健康也造成影响。CD14作为布鲁氏菌细胞壁成分脂多糖(LPS)的受体以及重要的天然免疫分子,参与败血症引起炎症反应启动。研究表明,抑制LPS上游炎症通路是一种有效的减弱免疫激活损害的治疗方法。RNA干扰(RNAi)是一种特异的高效下调基因表达的方法,本研究的目的是探索利用RNA干扰(RNAi) knockdown mCD14,进而研究布鲁氏菌感染RAW264.7细胞microRNA的变化。实验中转染含mCD14-shRNA-224的慢病毒载体于RAW264.7进而knockdown mCD14基因,得到稳定细胞系命名为224.3。通过qRT-PCR和Western Blot检测RNAi对mCD14表达的抑制效果。结果显示,RNAi能够特异地降低mCD14 mRNA和蛋白表达水平。为了研究CD14 knockdown布鲁氏菌感染引起的炎症反应中microRNA的变化及作用机制,布鲁氏菌感染224.3细胞后,利用miRNA基因芯片和qRT-PCR对miRNA表达差异分析,并对差异表达的microRNA的靶基因进行生物学预测。m... 

【文章页数】:48 页

【学位级别】:硕士

【文章目录】:
摘要
Abstract
英文缩略词对照表
1. 文献综述
    1.1 白细胞分化抗原14
    1.2 布鲁氏菌病研究现状
    1.3 microRNA研究进展
        1.3.1 microRNA的发现与命名
        1.3.2 microRNA的特征
        1.3.3 microRNA的生物合成
        1.3.4 microRNA调控机理
        1.3.5 microRNA的功能
        1.3.6 microRNA表达分析方法
        1.3.7 microRNA生物信息分析及靶基因预测
    1.4 研究目的意义、内容及技术路线
        1.4.1 研究目的意义
        1.4.2 研究内容
        1.4.3 技术路线
2. 材料与方法
    2.1 主要材料
        2.1.1 细胞及主要试剂
        2.1.2 引物的设计与合成
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 常用试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 建立mCD14 knockdown的RAW264.7稳定细胞系
        2.2.3 布鲁氏菌感染mCD14 knockdown的RAW264.7细胞
        2.2.4 mCD14 knockdown的RAW264.7细胞miRNA表达分析
3. 结果与分析
    3.1 慢病毒感染RAW264.7细胞mCD14表达的鉴定
    3.2 基因芯片检测miRNA表达差异分析
    3.3 qRT-PCR验证miRNA基因芯片结果
    3.4 靶基因预测及功能分类
4. 讨论
5. 结论
参考文献
在读期间科研成果
附录
致谢


【参考文献】:
期刊论文
[1]Role of LPS/CD14/TLR4-mediated inflammation in necrotizing enterocolitis:Pathogenesis and therapeutic implications[J]. Kwong L Chan,Kwong F Wong,John M Luk.  World Journal of Gastroenterology. 2009(38)
[2]多参数流式细胞术观察251例白血病细胞CD14表达的意义[J]. 宁铂涛,汤永民,沈红强,杨世隆.  实用肿瘤杂志. 2003(02)
[3]脂多糖受体的研究进展[J]. 刘兴,冯文莉,康格非.  国外医学.临床生物化学与检验学分册. 2001(03)
[4]CD14分子的受体作用及其信号传递[J]. 陈理华.  国外医学(免疫学分册). 2000(03)
[5]CD14生物学特性[J]. 白洁,荫俊.  国外医学(生理、病理科学与临床分册). 2000(02)
[6]LPS受体CD14的最新研究进展[J]. 刘轩,魏育林.  解剖科学进展. 1999(02)
[7]人CD14基因的克隆及序列测定[J]. 龙建银,薛沿宁,孙蕾,王会信.  生物化学与生物物理进展. 1998(04)



本文编号:3659896

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