牛冠状病毒、牛诺如病毒和牛嵴病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

发布时间：2023-05-22 05:41

　　为建立能同时检测牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛诺如病毒(bovine norovirus,BNoV)和牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKV)的方法,根据BCoV、BNoV和BKV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的片段大小分别为896,542,216 bp,建立了BCoV、BNoV和BKV的多重PCR检测方法。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻(calf diarrhea,CD)病原;BCoV、BNoV和BKV的最低检测限分别为9.51×10⁵,5.39×10⁵,2.23×10⁶ copies/μL。对采集自河南部分地区的127份CD样品的检测结果显示,BCoV的阳性率为14.96%(19/127),BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BKV的阳性率为4.72%(6/127),三者与单一PCR检测结果相一致。结果表明,本研究建立的多重PCR方法可用于BCoV、B...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 核酸提取
    1.3 引物设计与合成
    1.4 PCR扩增
    1.5 特异性试验
    1.6 敏感性试验
    1.7 重复性试验
    1.8 应用性试验
2 结果
    2.1 多重PCR体系的构建及优化
    2.2 特异性试验
    2.3 敏感性试验
    2.4 重复性试验
    2.5 应用性检测
3 讨论



本文编号：3822115