人α肿瘤坏死因子（hTNF-α）和γ干扰素（hIFN-γ）、鸡生殖细胞标志基因CVH和DAZL的克

发布时间：2023-06-04 03:43

　　hTNF-α是迄今为止所发现的直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性因子之一,由于毒副作用较大、半衰期短、低剂量抗肿瘤效果不显著等原因限制了临床上的广泛应用,但改造后的hTNF-α衍生物具有高效低毒的特点;hIFN-γ属于Ⅱ型干扰素,具有广谱的抗病毒作用,在医学临床上常用于病毒性疾病、肿瘤和自身免疫性疾病的治疗。禽类原始生殖细胞(PGCs)是配子的前体细胞,可以作为将外源基因转入基因组和生殖系的有效载体,因为PGCs能够通过血流靶向进入杂合子胚胎性索,将遗传特性直接传递给后代。如果将生殖细胞的标志基因DAZL和CVH与目的基因体内或体外共同导入PGCs,可能会提高这类细胞的生殖系传递能力,从而有助于解决转基因鸡效率低下的难题。方法:(1)从健康志愿者外周静脉血分离出淋巴细胞培养,培养液中添加脂多糖(LPS)激活巨噬细胞,用TRIzol法提取总RNA,运用RT-PCR技术克隆hTNF-α、hIFN-γ基因,并对hTNF-α基因进行突变改造;采用PCR技术从 pMD18-T-CVH、pMD18-T-DAZL 克隆鸡 CVH 和 DAZL 基因。(2)应用MultiSite Gateway技术构建卵...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
    第一章 hTNF-α、hIFN-γ、CVH和鸡DAZL基因研究进展
        1.1 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的研究进展
            1.1.1 肿瘤坏死因子-α的概述
            1.1.2 肿瘤坏死因子-α的生化特性
            1.1.3 肿瘤坏死因子-α基因组结构及表达
        1.2 人γ干扰素(hIFN-γ)的研究进展
            1.2.1 人γ干扰素(hIFN-γ)的概述
            1.2.2 hIFN-γ的分子生物学特性
            1.2.3 hIFN-γ的生物学作用
        1.3 CVH基因研究进展
            1.3.1 Vasa基因概述
            1.3.2 Vasa基因功能及作用机理
            1.3.3 Vasa基因的应用
            1.3.4 CVH基因表达
        1.4 DAZL基因研究进展
            1.4.1 DAZL基因概述
            1.4.2 DAZL基因的时空表达
            1.4.3 鸡DAZL基因的保守表达
            1.4.4 DAZL基因与分子标记
            1.4.5 DAZL与生殖细胞调控
        1.5 研究的目的与意义
实验研究
    第二章 hTNF-α、hIFN-γ、CVH、鸡 DAZL 基因克隆
        2.1 前言
        2.2 材料与方法
            2.2.1 仪器设备
            2.2.2 实验试剂
            2.2.3 常用溶液配制
            2.2.4 hTNF-α、hIFN-γ基因克隆
            2.2.5 CVH和鸡DAZL基因的克隆
        2.3 结果与分析
            2.3.1 hTNF-α、hIFN-γ基因的RT-PCR
            2.3.2 pMD18-T-hTNF-α重组质粒的构建
            2.3.3 TNF-α基因测序结果
            2.3.4 hTNF-α点突变PCR扩增
            2.3.5 CVH和鸡DAZL基因PCR扩增
            2.3.6 入门载体构建
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 慢病毒表达载体构建及体外表达
        3.1 前言
        3.2 材料与方法
            3.2.1 仪器设备
            3.2.2 实验试剂
            3.2.3 常用溶液配制
            3.2.4 慢病毒表达载体构建
            3.2.5 慢病毒表达载体去内毒素质粒中提
            3.2.6 慢病毒包装及表达检测
        3.3 结果与分析
            3.3.1 慢病毒载体酶切鉴定与测序结果
            3.3.2 去内毒素慢病毒载体质粒浓度及纯度测定
            3.3.2 慢病毒载体表达检测
        3.4 讨论
        3.5 小结
参考文献
致谢
作者简介
攻读硕士期间发表论文情况



本文编号：3830620