肠炎沙门氏菌致病机制及丁酸梭菌对其拮抗作用的探究

发布时间：2023-10-02 00:09

　　沙门氏菌是导致食源性疾病最重要的病原菌之一,主要感染猪、鸡等食品动物,并通过食物链由动物肉制品传递给人类,从而对公共健康造成危害。家禽被认为是携带沙门氏菌最重要的载体,其中肠炎沙门氏菌血清型分离率较高。目前,由于抗生素的大量使用甚至滥用造成耐药沙门氏菌的产生,这就使得我们迫切寻找一种抗生素替代物。丁酸梭菌由于广谱的抗菌活性、不容易产生耐药等特点以及广泛的生物学功能而备受关注。大量研究表明丁酸梭菌能够增强机体免疫功能、提高动物生产性能、抑制病原微生物生长等作用。然而,丁酸梭菌拮抗肠炎沙门氏菌感染雏鸡的作用机制尚未明确。因此,在了解动物源沙门氏菌耐药特点基础上,开展肠炎沙门菌的致病性研究及丁酸梭菌对其拮抗作用机理探究。主要研究内容如下:1.动物源沙门氏菌耐药特点本研究旨在了解动物源沙门氏菌耐药特点及流行情况。2015年8月到2016年7月年间,从山东省济南、临沂等八个地区山地散养鸡群、鸡屠宰场和猪屠宰场共采集1300份肛门棉拭子样品。沙门氏菌经分离鉴定后,采用平板凝集试验检测沙门氏菌血清型、采用纸片扩散的方法检测沙门氏菌对14种常用抗生素的敏感性,利用多位点序列分型(MLST)方法分析沙门...

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中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 沙门氏菌基本概况
    1.2 沙门氏菌流行状况
    1.3 沙门氏菌分子分型方法
        1.3.1 脉冲场凝胶电泳
        1.3.2 多位点序列分型(MLST)
        1.3.3 多位点可变数目串联重复序列分析
    1.4 沙门氏菌导致炎症反应
    1.5 抗生素在防治沙门氏菌上的应用及危害
    1.6 沙门氏菌耐药机制
        1.6.1 质粒介导的耐药性散播机制-基因盒-整合子系统
        1.6.2 抗生素靶标基因突变引起的耐药性
        1.6.3 细菌的主动外排机制
        1.6.4 外膜的通透性降低
    1.7 抗生素替代品
        1.7.1 抗菌肽
        1.7.2 中草药制剂
        1.7.3 益生菌
    1.8 益生菌益生功效
        1.8.1 益生菌提高动物生产性能
        1.8.2 益生菌增强肠道免疫屏障功能
    1.9 丁酸梭菌的研究进展
    1.10 蛋白质组学
        1.10.1 蛋白质组学研究进展
        1.10.2 蛋白质组学的功能与分类
        1.10.3 蛋白质组技术
    1.11 本研究目的及意义
2 材料和方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验所用菌株
        2.1.2 试验动物
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 常规耗材
        2.1.6 试剂配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 山地散养鸡群沙门氏菌流行情况及特点
        2.2.2 山东省猪和鸡屠宰场中沙门氏菌的血清型分布、耐药特点及携带Ⅰ类整合子情况
        2.2.3 肠炎沙门氏菌致病性及丁酸梭菌拮抗其感染肉鸡的作用机理
        2.2.4 丁酸梭菌调控肠道炎症和肠道屏障功能的作用机制
3 试验结果与分析
    3.1 山地散养鸡群沙门氏菌流行情况及特点
        3.1.1 山地散养鸡群样品分离结果
        3.1.2 沙门氏菌PCR鉴定结果
        3.1.3 沙门氏菌血清型分布
        3.1.4 药敏试验结果
        3.1.5 β内酰胺类耐药基因及喹诺酮类耐药基因的检测结果
        3.1.6 Ⅰ类整合子检测和基因盒特点
        3.1.7 多位点序列分型(MLST)结果
        3.1.8 ERIC-PCR分析结果
    3.2 山东省猪和鸡屠宰场中沙门氏菌的血清型分布、耐药特点及携带Ⅰ类整合子情况.
        3.2.1 沙门氏菌分离鉴定结果
        3.2.2 沙门氏菌血清分型结果
        3.2.3 药物敏感试验结果
        3.2.4 β内酰胺类耐药基因的检测结果
        3.2.5 Ⅰ类整合子检测和基因盒特点
        3.2.6 多位点序列分型(MLST)结果
    3.3 肠炎沙门氏菌致病性及丁酸梭菌拮抗其感染肉鸡的作用机理
        3.3.1 沙门氏菌计数结果
        3.3.2 盲肠肠道形态变化
        3.3.3 肝脏组织中细胞因子表达水平
        3.3.4 脾脏组织中细胞因子表达水平
        3.3.5 盲肠组织中细胞因子表达水平
        3.3.6 肝脏、脾脏和盲肠组织中MyD88信号通路相关基因表达水平
    3.4 丁酸梭菌调控肠道炎症和肠道屏障功能的作用机制
        3.4.1 丁酸梭菌对盲肠组织形态完整性的影响
        3.4.2 丁酸梭菌对血清中IgA和细胞因子的影响
        3.4.3 丁酸梭菌对外周血单个核细胞中CD4+和CD8+T细胞数量的影响
        3.4.4 丁酸梭菌对盲肠内容物微生物菌群的影响
        3.4.5 丁酸梭菌对肠道组织中细胞因子的影响
        3.4.6 丁酸梭菌对肠道组织中黏蛋白muc-2表达水平的影响
        3.4.7 丁酸梭菌对肠道组织紧密连接蛋白表达水平的影响
        3.4.8 丁酸梭菌对肠道组织中TLR4-、MyD88-和NF-κB信号通路的影响
        3.4.9 丁酸梭菌对空肠组织蛋白的影响
        3.4.10 丁酸梭菌对肠黏膜上皮细胞炎性细胞因子的影响
        3.4.11 丁酸梭菌对肠黏膜上皮细胞中黏蛋白muc-2表达水平的影响
        3.4.12 丁酸梭菌对肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白表达水平的影响
        3.4.13 丁酸梭菌对肠黏膜上皮细胞中TLR4-、MyD88-和NF-κB信号通路的影响
4 讨论
    4.1 山地散养鸡群沙门氏菌流行情况及特点
    4.2 山东省猪和鸡屠宰场中沙门氏菌的血清型分布、耐药特点及携带Ⅰ类整合子情况.
    4.3 肠炎沙门氏菌致病性及丁酸梭菌拮抗其感染肉鸡的作用机理
    4.4 丁酸梭菌调控肠道炎症和肠道屏障功能的作用机制
5 结论
6 创新点
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
获奖情况



本文编号：3849708