猪伪狂犬病毒河南流行株的分离鉴定与生物学特性研究

发布时间：2023-11-05 09:57

　　伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的多种家畜、家禽和野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主要症状的一种急性传染病。PRV可以感染不同年龄段的猪,主要引起妊娠母猪流产、产死胎和木乃伊胎;哺乳仔猪出现神经症状,衰竭死亡,死亡率几乎高达100%。我国自1947年刘永纯从猫体内分离到PRV以来,已有20多个省市报道发生了该病。在生产实践中,主要依靠疫苗尤其是基因工程缺失疫苗对PR进行防制,从而使该病得到有效控制。但2012年春季以来,在河南、吉林、黑龙江等多地区使用PRV基因缺失苗免疫的猪场出现疑似PR病例,本试验分离并鉴定了 PRV河南流行株,进行了gE、gC全基因测序及相关生物学特性研究,探索了河南分离株NY的免疫原性。采用PCR方法对河南不同地市采集的疑似PRV感染病料进行PCR检测,将PCR检测为阳性的病料接种ST细胞,分离到9株PRV,分别命名为NY、ZK、M5、JY、GY、MZ1、MZ2、LGX、ZM。9株病毒均能在ST细胞上出现较稳定的CPE,且均能扩增出特异性gE基因片段(429bp),传代至第7代时病毒毒力效价基本稳定在105.6TCID50/0.1mL...

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
文献综述
    1 伪狂犬病毒的病原学
        1.1 PRV的分类地位
        1.2 PRV的形态和理化特性
        1.3 PRV的血凝性
        1.4 PRV的培养特性
        1.5 PRV的病原性
        1.6 PRV对猪的致病性
    2 伪狂犬病毒的流行现状及危害
    3 伪狂犬病毒的分子生物学特性
        3.1 伪狂犬病毒的基因组
        3.2 伪狂犬病毒的蛋白及其功能
    4 PR的免疫预防
        4.1 灭活疫苗
        4.2 自然弱毒苗
        4.3 基因缺失疫苗
        4.4 发展中的疫苗
引言
试验一 猪伪狂犬病毒河南流行株的分离鉴定和生物学特性研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 引物设计
        1.3 组织病料中PRV DNA的PCR检测
        1.4 病毒的分离与培养
        1.5 PRV gE基因的检测
        1.6 病毒滴度TCID₅₀的测定
        1.7 PRV NY株理化特性研究
        1.8 PRV NY株形态学观察
        1.9 PRV NY株形态学观察
    2 结果
        2.1 组织病料中PRV DNA的PCR检测结果
        2.2 PRV的细胞培养与细胞病变观察
        2.3 PRV gE基因的PCR扩增结果
        2.4 病毒滴度TCID₅₀结果
        2.5 病毒感染小鼠试验结果
        2.6 PRV NY株理化特性研究结果
        2.7 病毒形态学观察结果
    3 结论与讨论
试验二 猪伪狂犬病毒河南流行株gE全基因的克隆与序列分析
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 引物设计
        1.3 病毒DNA的提取及gE全基因的扩增
        1.4 PRV gE全基因的克隆和鉴定
        1.5 PRV gE全基因的序列分析
    2 结果
        2.1 PRV gE全基因的扩增结果
        2.2 PRV gE全基因重组质粒的PCR鉴定
        2.3 PRV gE全基因重组质粒的酶切鉴定
        2.4 PRV gE全基因的测序结果
        2.5 PRV分离株gE全基因序列同源性分析
        2.6 PRV分离株gE全基因推导氨基酸的序列分析
        2.7 PRV分离株gE全基因系统发育进化关系分析
    3 结论与讨论
试验三 猪伪狂犬病毒河南流行株gC全基因的克隆与序列分析
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 引物设计
        1.3 病毒DNA的提取及gC全基因的扩增
        1.4 PRVgC全基因的克隆和鉴定
        1.5 PRVgC全基因的序列分析
    2 结果
        2.1 PRV gC全基因的扩增结果
        2.2 PRV gC全基因重组质粒的PCR鉴定
        2.3 PRV gC全基因重组质粒的酶切鉴定
        2.4 PRV gC全基因的测序结果
        2.5 PRV分离株gC全基因序列同源性分析
        2.6 PRV分离株gC全基因推导氨基酸的序列分析
        2.7 PRV分离株gC全基因系统发育进化关系分析
    3 结论与讨论
试验四 猪伪狂犬病毒NY株的免疫原性分析
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 病毒滴度TCID₅₀测定结果
        2.2 病毒灭活效果检验
        2.3 PRV NY株乳化剂的鉴定
        2.4 PRV NY株攻毒试验结果
        2.5 PRV NY株中和试验结果
    3 结论与讨论
全文总结
参考文献
Abstract



本文编号：3860803