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鹅GnRH基因CDS区克

发布时间:2023-11-24 20:28
  本研究旨在了解鹅GnRH基因的CDS区序列及其蛋白表达情况,研究鹅GnRH蛋白的生理功能,为进一步阐明GnRH蛋白影响鹅繁殖性能的调控机制提供理论基础。采用RT-PCR方法从溆浦鹅下丘脑扩增获得GnRH基因的CDS区序列,将测序正确的DNA序列定向克隆到pET28a(+),构建表达载体pET28a-GnRH,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌表达目的蛋白,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测和Western blot分析。结果显示:获得的溆浦鹅GnRH基因CDS区部分序列,含有270个核苷酸,编码前体蛋白中的90个氨基酸;溆浦鹅GnRH基因CDS区在大肠杆菌中得到高效表达,GnRH基因CDS区的目的蛋白为9 900,最终测得菌体湿重为0.6g/L,纯化后得到的蛋白为2030mg/L;清晰检测到GnRH基因表达的蛋白特异带,试验获得的抗体对原核表达的GnRH蛋白具有特异性反应;鹅GnRH基因在动物进化中高度保守,研究得到的鹅GnRH前体蛋白可为进一步研究GnRH基因的生物功能以及其对鹅就巢、产蛋等繁殖性状的影响奠定基础。

【文章页数】:7 页

【文章目录】:
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 主要试剂及菌种
    1.3 RT-PCR及扩增产物的纯化
    1.4 GnRH基因的克隆和序列分析
    1.5 GnRH基因原核表达质粒的构建、筛选与鉴定
    1.6 重组GnRH蛋白的诱导表达和纯化
    1.7 制备GnRH抗血清
    1.8 重组pET28-GnRH蛋白的Western blot检测
2 结果
    2.1 GnRH基因RT-PCR扩增
    2.2 GnRH重组质粒鉴定
    2.3 GnRH重组质粒的双酶切鉴定
    2.4 GnRH基因的cDNA及氨基酸序列
    2.5 GnRH基因的系统进化树
    2.6 GnRH基因在大肠杆菌中的表达
        2.6.1 GnRH-pET-28a重组质粒双酶切鉴定
        2.6.2 SDS-PAGE分析
    2.7 GnRH蛋白的纯化与检测
        2.7.1 Western blot检测
3 讨论



本文编号:3866543

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