弓形虫单管巢式PCR检测方法的建立及奶山羊弓形虫ITS1与529bp基因序列分析

发布时间：2023-11-25 03:42

　　弓形虫病是由刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）感染引起的疾病，可感染几乎所有的恒温动物，是最流行的寄生原虫之一。引起山羊胎儿死亡的重要原因之一就是刚地弓形虫这种寄生原虫。卵囊是由初次感染的猫产生的，这一寄生虫阶段与弓形虫传播感染有很大关系。妊娠期山羊初次感染弓形虫可发生胎盘和胎儿感染，从而导致胎儿死亡和重吸收，流产或死胎。因此，及时、准确的诊断弓形虫病是很有必要的。 病原学检测方法耗时长，敏感性低；而血清学检测结果易出现假阴性或假阳性；分子生物学诊断中，常规PCR敏感性较低，而巢式PCR敏感性、特异性都较高，但与常规PCR方法相比操作繁琐且更易污染。为了尽量避免污染、简化试验步骤，本研究基于529bp重复序列，建立一套单管巢式PCR检测弓形虫的方法，并应用于奶山羊血液样品中弓形虫的检测。其结果如下： 弓形虫RH虫株DNA（阳性对照）PCR扩增有216bp大小条带且无杂带，以阿米巴原虫、微小隐孢子虫、蓝氏贾第虫DNA为模板及阴性对照无条带。用连续倍比稀释的弓形虫RH虫株DNA为模板进行扩增，最低可检测到1fg的DNA。 应用单管巢式PCR检测奶山羊血液DNA样品137份，其...

【文章页数】：38 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
文献综述
    第一章 弓形虫病研究进展
        1.1 弓形虫生活史
        1.2 弓形虫与宿主之间的相互作用
        1.3 流行病学
        1.4 临床症状
        1.5 病理变化
        1.6 诊断
            1.6.1 病原学检查
            1.6.2 血清学试验
            1.6.3 分子生物学诊断
        1.7 防治
            1.7.1 猫源感染
            1.7.2 综合管理
            1.7.3 免疫接种
        1.8 公共卫生与人畜共患病
研究内容
    第二章 单管巢式 PCR 检测弓形虫方法的建立及应用
        2.1 材料与方法
            2.1.1 试剂及药品
            2.1.2 仪器与设备
            2.1.3 实验样本及来源
            2.1.4 样本 DNA 的提取
            2.1.5 引物的设计与合成
            2.1.6 单管巢式 PCR 反应体系
            2.1.7 特异性试验
            2.1.8 敏感性试验
            2.1.9 应用性试验
            2.1.10 结果判定
        2.2 结果与分析
            2.2.1 PCR 扩增结果
            2.2.2 特异性试验结果
            2.2.3 敏感性试验结果
            2.2.4 应用性试验结果
            2.2.5 讨论
        2.3 小结
    第三章 奶山羊感染弓形虫的基因序列分析
        3.1 材料与方法
            3.1.1 试剂及仪器
            3.1.2 样本及来源
            3.1.3 引物的设计与合成
            3.1.4 巢式 PCR 反应体系
            3.1.5 结果判定
        3.2 结果与讨论
            3.2.1 ITS1 基因测序结果
            3.2.2 529bp 重复序列测序结果
            3.2.3 529bp 重复序列进化分析
            3.2.4 讨论
        3.3 小结
结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3867202