鸡催乳素和新城疫病毒F基因疫苗联合免疫研究

发布时间：2023-12-08 20:02

　　PRL是禽类就巢发生和维持的关键激素,F蛋白是新城疫病毒的主要宿主免疫保护性抗原。主动免疫鸡催乳素(Prolactin, PRL)和新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV) F基因既可改变雌禽的繁殖性能,提高产蛋量,又可改善免疫性能。本研究应用基因克隆、细胞培养、基因免疫、蛋白印迹等技术,构建鸡催乳素和新城疫病毒(NDV) FDNA重组表达质粒,为研制鸡催乳素和新城疫基因疫苗奠定了基础。 1、鸡PRL和NDV F基因的原核表达与免疫特性鉴定 将鸡催乳素和NDV F基因克隆于pGEX-6P-1载体中,转化大肠杆菌BL21用0.5mM IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果分析PRL、F基因获得高量表达,大小分别约为54kDa和86kDa,与预期结果相符,表达产物以融合蛋白包涵体的形式出现在沉淀中。Western blot结果表明,融合表达的GST-PRL和GST-F蛋白能与小鼠血清发生特异性反应,证明其抗原性良好。经包涵体洗液裂解后得到纯化蛋白GST-PRL和GST-F分别免疫ICR小鼠,获得多克隆抗体,从而为PRL和F蛋白功能研究奠定了基础。 2、共表...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 鸡催乳素、新城疫和DNA疫苗的研究进展
    1.1 鸡催乳素的研究概况
    1.2 鸡新城疫的研究概况
    1.3 DNA疫苗研究进展
    参考文献
第二章 鸡PRL和NDV F基因的原核表达与免疫特性鉴定
    1 材料与方法
        1.1 载体和菌株
        1.2 试剂和酶类
        1.3 鸡PRL和新城疫F基因片段引物的设计与合成
        1.4 PRL和NDV F基因PCR扩增及纯化
        1.5 PRL、NDV F原核表达重组质粒的构建、表达及重组蛋白的纯化
        1.6 PRL和NDV F蛋白多克隆抗体制备
        1.7 Western blot
    2. 结果
        2.1 PRL和NDV F基因片段重组质粒的构建
        2.2 PRL和NDV F重组蛋白表达与Western blot鉴定
    3 讨论
    参考文献
第三章 共表达PRL和NDV F基因的真核质粒构建鉴定
    1 材料
        1.1 质粒、菌株
        1.2 试剂
    2 方法
        2.1 PRL及NDV F基因的扩增
        2.2 PRL和NDV F基因的回收纯化
        2.3 重组真核质粒构建
        2.4 重组质粒的真核表达鉴定
    3 结果
        3.1 重组真核质粒的构建与鉴定
        3.2 Western blot鉴定蛋白的表达
    4 讨论
    参考文献
第四章 体外表达PRL和NDV F蛋白真核质粒对鸡生产性能和免疫特性研究
    1 材料
        1.1 质粒与病毒
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 质粒的大量制备
        2.2 动物分组与免疫实验
        2.3 鸡产蛋性能和血清中PRL含量测定
        2.4 ELISA抗体检测
        2.5 淋巴细胞增殖实验
        2.6 细胞因子测定
        2.7 数据统计分析
    3 结果
        3.1 免疫后鸡就巢概况和产蛋性能
        3.2 免疫后鸡血清中PRL变化规律
        3.3 体液免疫应答
        3.4 细胞免疫应答
    4 讨论
    参考文献
全文总结
致谢



本文编号：3871061