猪瘟强毒株与兔化弱毒疫苗株的环介导等温扩增鉴别检测

发布时间：2024-01-12 08:24

　　猪瘟（classical swine fever，CSF）是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒（classicalswine fever virus，CSFV）引起的一种重大传染病，具有很高的死亡率，对我国生猪产业造成巨大的损害。CSFV是单股正链RNA病毒，基因组大小约为12.3kb，编码一个大的多聚体蛋白，蛋白酶将其裂解成12种蛋白，包括8种非结构蛋白（P7、Npro、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B）和4种结构蛋白（囊膜糖蛋白Erns、衣壳蛋白C、E1、E2），其中，5′-UTR、3′-UTR、NS5B基因序列比较保守，而NS5B常用于CSFV基因分型。目前，我国猪瘟的防控主要采用猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）免疫，但是由于缺乏相应的血清学标志和配套的鉴别检测方法，其在我国的大规模应用，使得通过抗体检测很难区分免疫弱毒和野毒感染，不利于猪瘟的净化。 针对猪瘟病毒野毒感染与疫苗免疫鉴别诊断的关键问题，本研究参照GenBank中登录的CSFV标准强毒株（shimen、Alfort、Brescia等）、疫苗株（HCLV、Chinese C、Rimes等）、不同基因亚型的C...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 猪瘟
        1.1.1 猪瘟的症状及危害
        1.1.2 中国猪瘟的流行特点与分子流行病学
        1.1.3 猪瘟防控存在的问题及防治措施
    1.2 猪瘟病毒
        1.2.1 猪瘟病毒的基本结构
        1.2.2 猪瘟病毒基因组结构及编码的蛋白
        1.2.3 猪瘟病毒的检测方法
    1.3 环介导等温扩增
        1.3.1 环介导等温扩增的原理
        1.3.2 环介导等温扩增的应用
        1.3.3 环介导等温扩增的优缺点
    1.4 研究意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 毒株与病料
        2.1.2 所用仪器设备
        2.1.3 所用试剂
        2.1.4 常用溶液的配制
    2.2 方法
        2.2.1 序列对比分析
        2.2.2 引物设计与合成
        2.2.3 CSFV 的分离和培养
        2.2.4 病毒 RNA/DNA 的提取及 RT-PCR 鉴定
        2.2.5 猪瘟强毒株与弱毒疫苗株的 LAMP 检测方法的优化
        2.2.6 LAMP 扩增产物的可视化及琼脂糖凝胶电泳检测方法
        2.2.7 LAMP 敏感性检测
        2.2.8 LAMP 特异性检测
        2.2.9 LAMP 重复性和稳定性试验
        2.2.10 CSFV RT-LAMP 反应
        2.2.11 RT-LAMP 检测猪病料
        2.2.12 7500-fast 实时荧光定量 PCR 仪对 LAMP 扩增实时监测
3 结果
    3.1 CSFV 接种 PK-15 细胞的培养
    3.2 CSFV 强毒株和疫苗株 RT-PCR 结果
    3.3 CSFV LAMP 反应条件的确定
        3.3.1 LAMP 反应温度的确定
        3.3.2 LAMP 反应时间的确定
    3.4 CSFV 强毒株和疫苗株的 LAMP 扩增可视化及琼脂糖凝胶电泳结果
    3.5 LAMP 敏感性检测
    3.6 LAMP 特异性检测
    3.7 LAMP 重复性和稳定性试验
    3.8 RT-LAMP 符合率检测
    3.9 7500-fast 实时荧光定量 PCR 仪对 LAMP 实时监控
4 讨论
5 结论
参考文献
附录：英文缩写一览表
致谢
作者简历
发表论文情况



本文编号：3877873