C型产气荚膜梭菌对仔猪小肠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路关键分子的影响
发布时间：2024-01-14 15:43
仔猪腹泻是生猪养殖常见的肠道性疾病之一,发病时易造成仔猪免疫机能下降、生长变缓、饲料利用率降低、死亡率上升等。据统计,每年仔猪腹泻死亡占总死亡数的半数之多,造成巨大的经济损失,严重危害养猪业的健康发展。根据仔猪腹泻的病因,可分为生理性腹泻、营养性腹泻、应激性腹泻、自身性腹泻以及疾病性腹泻。疾病性腹泻包括病毒性腹泻、寄生虫性腹泻以及细菌性腹泻等。其中C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens type C,C.perfringens)是引发仔猪细菌性腹泻的因素之一,主要集中在7日龄以内仔猪,发病率(6080%)和死亡率(80100%)极高。虽然该疾病在分子流行性病学的调查、诊断、预防及治疗方面取得一定的进展。但有关C.perfringens引起腹泻在基因编码蛋白功能分析等分子生物学领域尚不清楚,尤其是仔猪感染C.perfringens引起的免疫调节机制以及激活信号通路的调控等方面。本试验以30头二元猪(大白猪×长白猪)为试验对象,随机选取5头作为对照组(NC),余下25头经口服诱导建立仔猪腹泻模型,通过记录腹泻评分及精神状...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
SUMMARY
英文缩略词
第一章 文献综述
1 仔猪腹泻的危害
1.1 仔猪腹泻的主要原因
1.1.1 生理性因素
1.1.2 营养性腹泻
1.1.3 饲养管理和环境应激导致腹泻
1.1.4 疾病引起的腹泻
1.1.4.1 病毒性腹泻
1.1.4.2 寄生虫性腹泻
1.1.4.3 细菌性腹泻
1.2 产气荚膜梭菌
1.2.1 产气荚膜梭菌类型
1.2.2 C型产气荚膜梭菌的致病机制
1.2.3 产气荚膜梭菌疫苗的研究进展
2 Toll样受体的研究进展
2.1 Toll样受体的发现
2.2 先天性免疫及特点
2.3 TLRs与天然免疫和获得性免疫的关系
2.4 TLR4分布、结构及功能
2.5 TLR4与肠道相关性疾病
2.6 MyD88依赖性和非依赖性途径
2.7 NF-κB在免疫应答和炎症反应中的作用
2.8 TLRs信号通路下游炎性因子与肠道性疾病的机制
3 研究的目的和意义
第二章 材料与方法
1 试验仔猪
2 试剂与仪器
2.1 主要试剂
2.2 主要仪器
3 攻毒试验
3.1 C型产气荚膜梭菌的培养
3.2 攻毒
4 总RNA的提取
4.1 超微量分光光度计检测mRNA的浓度和纯度
4.2 反转录
4.3 引物的设计与合成
4.4 目的基因普通PCR筛选扩增条件
4.5 切胶回收
4.6 连接反应
4.7 菌体质粒重组及PCR鉴定
4.8 测序
4.9 qRT-PCR条件
5 数据的处理
6 Western blot检测HMGB1蛋白在空肠和回肠中的表达
6.1 肠组织总蛋白的提取
6.2 标准曲线的绘制
6.3 Western blot免疫印迹
7 ELISA试验
7.1 组织匀浆的制备
7.2 ELISA检测细胞因子含量
7.3 标准曲线的绘制
8 数据统计处理
第三章 结果与分析
1 荧光定量PCR
1.1 总RNA的提取结果
1.2 扩增条件的优化
1.3 目的片段的确定
1.4 qRT-PCR溶解曲线
1.5 qRT-PCR扩增曲线
2 目的基因mRNA的表达量
2.1 TLR2、TLR4和TLR9在空肠和回肠组织中的表达
2.2 MyD88和NF-κB在空肠和回肠组织中的表达
2.3 TLRs信号通路相关基因在空肠和回肠组织中的表达
2.4 TLRs信号通路中的细胞因子在空肠和回肠中的表达
3 空肠和回肠组织中TLR4/HMGB1/NF-κB蛋白的表达
4 ELISA的检测结果
4.1 空肠和回肠组织中细胞因子含量
4.2 ELISA检测血清中免疫球蛋白含量的结果
第四章 讨论
1 感染C.perfringens能够激活TLRs信号通路
2 感染C.perfringens能够促使TLR4与其配体HMGB1的结合
3 感染C.perfringens能够激活TLRs下游炎症因子
4 感染C.perfringens影响血清中免疫球蛋白含量的变化
小结
第五章 结论
参考文献
附录
致谢
个人简介
导师简介
本文编号：3878510
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
SUMMARY
英文缩略词
第一章 文献综述
1 仔猪腹泻的危害
1.1 仔猪腹泻的主要原因
1.1.1 生理性因素
1.1.2 营养性腹泻
1.1.3 饲养管理和环境应激导致腹泻
1.1.4 疾病引起的腹泻
1.1.4.1 病毒性腹泻
1.1.4.2 寄生虫性腹泻
1.1.4.3 细菌性腹泻
1.2 产气荚膜梭菌
1.2.1 产气荚膜梭菌类型
1.2.2 C型产气荚膜梭菌的致病机制
1.2.3 产气荚膜梭菌疫苗的研究进展
2 Toll样受体的研究进展
2.1 Toll样受体的发现
2.2 先天性免疫及特点
2.3 TLRs与天然免疫和获得性免疫的关系
2.4 TLR4分布、结构及功能
2.5 TLR4与肠道相关性疾病
2.6 MyD88依赖性和非依赖性途径
2.7 NF-κB在免疫应答和炎症反应中的作用
2.8 TLRs信号通路下游炎性因子与肠道性疾病的机制
3 研究的目的和意义
第二章 材料与方法
1 试验仔猪
2 试剂与仪器
2.1 主要试剂
2.2 主要仪器
3 攻毒试验
3.1 C型产气荚膜梭菌的培养
3.2 攻毒
4 总RNA的提取
4.1 超微量分光光度计检测mRNA的浓度和纯度
4.2 反转录
4.3 引物的设计与合成
4.4 目的基因普通PCR筛选扩增条件
4.5 切胶回收
4.6 连接反应
4.7 菌体质粒重组及PCR鉴定
4.8 测序
4.9 qRT-PCR条件
5 数据的处理
6 Western blot检测HMGB1蛋白在空肠和回肠中的表达
6.1 肠组织总蛋白的提取
6.2 标准曲线的绘制
6.3 Western blot免疫印迹
7 ELISA试验
7.1 组织匀浆的制备
7.2 ELISA检测细胞因子含量
7.3 标准曲线的绘制
8 数据统计处理
第三章 结果与分析
1 荧光定量PCR
1.1 总RNA的提取结果
1.2 扩增条件的优化
1.3 目的片段的确定
1.4 qRT-PCR溶解曲线
1.5 qRT-PCR扩增曲线
2 目的基因mRNA的表达量
2.1 TLR2、TLR4和TLR9在空肠和回肠组织中的表达
2.2 MyD88和NF-κB在空肠和回肠组织中的表达
2.3 TLRs信号通路相关基因在空肠和回肠组织中的表达
2.4 TLRs信号通路中的细胞因子在空肠和回肠中的表达
3 空肠和回肠组织中TLR4/HMGB1/NF-κB蛋白的表达
4 ELISA的检测结果
4.1 空肠和回肠组织中细胞因子含量
4.2 ELISA检测血清中免疫球蛋白含量的结果
第四章 讨论
1 感染C.perfringens能够激活TLRs信号通路
2 感染C.perfringens能够促使TLR4与其配体HMGB1的结合
3 感染C.perfringens能够激活TLRs下游炎症因子
4 感染C.perfringens影响血清中免疫球蛋白含量的变化
小结
第五章 结论
参考文献
附录
致谢
个人简介
导师简介
本文编号：3878510
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3878510.html
最近更新
教材专著
