肠炎沙门氏菌鞭毛素fliC基因缺失突变株的构建及相关功能性分析

发布时间：2024-01-19 14:49

　　肠炎沙门氏菌{Salmonella enteritidis, SE)是一大类革兰氏阴性(G-)无芽孢直杆菌,有鞭毛,能运动,为重要的人畜共患病原菌。肠炎沙门氏菌不仅使养禽业蒙受严重的经济损失,还是食源性重要病原菌。误食肠炎沙门氏菌感染禽蛋及禽肉制品能够引发人类的食物中毒,因此其在公共卫生学上也具有重要意义。肠炎沙门氏菌的致病性与其多种毒力因子关系紧密。通过不同的致病机制,肠炎沙门氏菌的毒力因子能够共同作用于宿主,造成宿主机体发病甚至死亡。在这肠炎沙门氏菌的多种毒力因子之中,鞭毛无疑是不容忽视的一种。沙门氏菌鞭毛作为沙门氏菌的主要运动器官,功能是辅助其完成有目的性的运动,典型如化学趋向性运动。但近十年来,沙门氏菌鞭毛与细菌生物被膜的形成及在诱导宿主机体发生免疫应答及炎症反应,尤其是其在致病过程中对宿主(小肠肠道粘膜等)的粘附定殖作用已逐渐引起了学术界的高度关注。本文以沙门氏菌鞭毛素基因fliC为研究对象,构建肠炎沙门氏菌野生株的鞭毛素fliC基因缺失株及在SEF14菌毛主要亚单位sefA缺失株的基础上构建菌毛鞭毛缺失株,继而通过体外细胞试验分析比较沙门氏菌鞭毛在肠炎沙门氏菌感染过程中侵袭...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
目录
符号说明
文献综述
    肠炎沙门氏菌感染现状
    沙门氏菌鞭毛结构及功能
    沙门氏菌鞭毛隶属于粘附素大类
    鞭毛运动性与毒力
    鞭毛与细菌的生物膜形成
    鞭毛与细菌的粘附和侵袭
    Ⅲ型分泌系统结构和功能
    沙门菌菌毛
    沙门菌毛的分类
    参考文献
研究一 肠炎沙门氏菌鞭毛主要编码基因fliC缺失突变株及相应回补株的构建
    摘要
    Abstract
    1 材料
        1.1 菌株、抗体及质粒
        1.2 培养基和主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 fliC基因缺失引物的设计
        2.2 融合PCR产物的制备和纯化
        2.3 感受态细胞的制备及转化
            2.3.1 感受态细胞的制备
            2.3.2 质粒pKD46的转化
            2.3.3 Red重组的诱导和感受态细胞的制备
        2.4 电转化
        2.5 消除质粒pKD46
        2.6 一次同源重组菌ΔfliC::Cat的PCR鉴定
        2.7 FLP位点专一性重组
        2.8 第二次重组菌XΔfliC的鉴定
        2.9 互补株的构建
        2.10 半固体运动试验
        2.11 负染和透射电镜(Transmission Electron Microscopy,TEM)观察
        2.12 玻板凝集试验
    3 结果
        3.1 融合PCR产物的制备
        3.2 同源重组菌的PCR鉴定
        3.4 鉴定引物P3、P4扩增ΧΔ∥fliC菌株的序列分析
        3.5 XΔfliC 缺失株的表型分析
    4 讨论
    参考文献
研究二 鞭毛对肠炎沙门氏菌生物膜形成的影响分析
    摘要
    Abstract
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 培养基和主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 野生株、突变株与相应回补株生长曲线测定
        2.2 结晶紫染色法定性测定野生株、缺失株与相应回补株生物膜形成能力
        2.3 结晶紫染色法定量测定野生株、缺失株与相应回补株生物膜形成
    3 结果
        3.1 野生株、突变株与相应回补株生长曲线测定
        3.2 野生株、缺失株与相应回补株生物膜形成能力定性分析
        3.3 野生株、缺失株与相应回补株生物膜形成能力定量分析
    4 讨论
    参考文献
研究三 肠炎沙门氏菌鞭毛与肠上皮细胞Caco-2和IPEC-J2细胞的体外黏附作用
    摘要
    Abstract
    1 材料
        1.1 菌株及细胞系
        1.2 培养基和主要试剂
        1.3 主要仪器设备
    2 方法
        2.1 菌株的准备
        2.2 Caco-2细胞粘附试验
            2.2.1 Caco-2细胞的培养与传代
            2.2.2 Caco-2细胞粘附试验
        2.3 IPEC-2细胞粘附试验
        2.4 数据处理
    3 结果
        3.1 Caco-2细胞粘附试验
        3.2 IPEC-2细胞粘附试验
    4 讨论
    参考文献
全文总结
致谢



本文编号：3879990